실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
PCR 고수 있으신가요. SKOV-3 PCR Band한번만 봐주세요
레벨2 사고치는뚝딱이 (대학생)
안녕하세요 몇달째 SKOV-3 PCR로 애를 먹고 있는 대학원생입니다.
Annealing temperature도 범위가 10도 가까이 조절했는데도 불구하고 잘 잡히지 않아 문의드립니다.
다른 Cell로 진행했을 때 54~55 사이의 온도에서 dimer하나 없이 깔끔히 나오는데
꼭 SKOV-3로만 진행하면 이렇게 나타납니다. 경험 많으신 분들의 조언이 필요합니다.
셀마다 서열이 다르니까 같은 Primer여도 annealing temperature가 다른건가요?
그렇다하더라도 온도 차이가 크게 나지 않을 것 같은데 유독 SKOV만 나오지 않아서 머리가 아프네요..
Primer: GAPDH
5' : 5' GAAGGTGAAGGTCGGAGTC 3' TM: 56.2
3' : 5' GAAGATGGTGATGGGATTTC 3' TM: 52.8
PCR 조건은 28Cycle, 52~59.9도 입니다.
RNA문제인가도 싶어서
Purify 280/260, 260/230, 1.8~2.2 가 정상범주가 아니면 사용하지 않고 있습니다.
혹시 이렇게 나오는 경우 무엇의 문제인지 알려주시면 감사하겠습니다.
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