실험 Q&A Immunology > ELISA
ELISA Cytokine IL-1β, IL-6 Sample 처리에 관한 궁금한 점이 있습니다.
레벨1 pplloo (대학원생)
안녕하세요 이제 막 입학한 초보 석사입니다.
이번에 ELISA을 통해 HaCaT cell에 drug 처리를 하여 나온 IL-1β, IL-6의 생성량을 보려고 합니다.
하지만 결과는 Standard는 R^2 0.997정도로 잘 나오는 반면 Sample은 Blank와 인접한 결과를 나와서 고민입니다.
Sample assay는 seeding -> starvation 24H -> Treat -> Harvest(media 상등액을 12,400rpm 10min 처리 후 다시 상등액을 -20도에서 보관) 입니다.
ELISA assay는 kit 제조사인 R&D system의 지침대로 진행하였습니다.
ELISA 중 standard와 sample을 96well plate에 넣을 때, Harvest한 media을 원액 그대로 넣어주었는데요.
Bric에서 검색하였을 때, 대부분 Media을 적절한 희석액에 희석 후 사용하셨던데, 희석하지 않고 그냥 사용시 media의 성분에 의해 간섭이 생길수있다는 글을 봤습니다.
혹시 media을 희석하지 않아 ELISA 결과에 문제가 생긴것인지 여쭙고 싶습니다.
아 참고로 media는 DMEM을 사용하였습니다.
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