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BioLab 박소정 교수
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질문 Lewis lung carcinoma(LLC) tumor tissue에서의 density gradient centrifuge
개구리Coolzinc(과기인)  | 04.08 19:48

저는 mouse에 s.c로 injection한 LLC tumor 조직을 gentleMACS로 dissociation 후 그 안에 존재하는 면역세포들을 분석하고 있습니다. 

그런데 flow cytometry시 tumor cell에 의해 aquisition 시간이 너무 오래 걸려 leukocytes를 enrichment 시키기 위해 density gradient centrifuge를 진행하고자 하였습니다. 

제가 찾아본 protocol 상에서는 Cytiva 사의 percoll 제품을 기준으로 

40%-80%, 30%-70%, 44%-67% 등의 조건으로 낮은 농도의 solution에 cell을 re-suspension 후 overlay 하여 centrifuge를 돌리는 것으로 나타나 있는데 실제로 진행해보면 분리가 잘 되지 않아 경험자의 조언을 듣고자 합니다. 

지금까지 해본 조건으로는 위 언급한 %의 percoll을 이용하여 

1. 325g acc. 5 brake. 5 25min, RT

2. 600g acc. 0 brake. 0 30min, RT

3. 800g acc. 0 brake. 0 30min, RT 

로 진행하였는데 모든 cell이 interphase에 모여버리거나 거의 대부분 pellet으로 down 되어 버리는 현상만이 관측되고 있습니다. 

해당 tumor cell로 density gradient centrifuge 실험을 해보신 분이 계시다면 tip을 알려주시면 감사하겠습니다. 

#LLC
 
#percoll
 
#leukocyte
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