CRISPR CAS9 KO 을 ESC 에서 시키기 위해서 guide RNA 을 제작했는데요 지금와서 생각해보니 guide RNA 가 intron 부분을 target 하고 있더라고요 .......intron 부분을 target 해도 exon splicing 될때 이상이 생겨서 ptn 발현이 안될까요?? KO 이 제대로 되지 않을까봐 걱정됩니다...
RNP로 transfection시켜서 KO시키려 하는 것이죠? 기존에 validation이 된것이라면 문제는 없을거 같습니다.
문제는 single cell clone으로 가야 하는데 embryonic stem cell 에서 RNP로 KO시키는 효율은 매우 낮습니다. 이럼 얻어지 많은 clone들은 그냥 버려야 한다는 말이 되죠.. 저라면 lenti나 다른 방법으로 KO을 시키겠습니다.
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