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질문 ht-29로 IL-8 kit assay를 진행하는데 control 값 관련해서 질문드려요
알cell counting(대학원생)  | 2022.03.16 20:55
첨부파일 파일첨부: rmfla.PNG (12 KB)
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안녕하세요 

실험실에서 HT-29 CELL을 이용해서 IL-8 실험을 진행하고 있는데 CONTROL 값이 너무 높게 나와서 질문드려요.

CELL SEEDING은 96WELL에 1*10^5으로 200ul 씩 분주해서 24H 배양하고, SAMPLE 처리후 LPS처리를 진행하고 20H 뒤에 ASSAY를 진행하는데 SAMPLE 값은 잘 나오는데 CONTROL이 높게 나와서 결과가 -값이나옴니다.

CELL이 문제가 있어서 CONTROL이 높게 나오는 걸까요? 

LPS처리시간이 길어 높게 나오는 걸까요?

 

CELL이 문제가 있다면 제가 RAW CELL만 하다가 이번에 HT29 를 시작했는데 계대할때 0.25% tripsin을 처리해서 진행하는데 계대 후에 관찰해 보면 바닥에붙어있는 cell도 있고 부유하고 있는 cell도 꽤 관찰이 되는데 cell 이 문제가 있는걸까요? mtt 도 진행해 봤을때 세포가 죽지는 않거든요...

아니면 원래 ht-29를 이용해서 IL-8을 관찰할때 CONTROL이 높게나오는걸까요? LPS랑 어느정도 값 차이가 나면 괜찮은 실험결과를 얻었다고 할 수 있을까요?

그리고 HT-29 CELL상태가 계대후에 부유셀이 있는게 맞을까요?

답변 주시면 감사드려요.^^

#IL-8
 
#HT-29
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2022.03.16   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
이 세포는 부착세포입니다.

Con은 무처리군인가요?

LPS와 10ug/ml에서 10ug/ml은 시료처리군 같은데 LPS보다 높게 나온건 정상인가요?

OD값이 아닌 STD와 비교해서 양으로 표시하면 어느정도 되나요?
알cell counting  |  2022.03.17   

CONTROL은 LPS, SAMPLE처리 하지 않은 대조군이고, LPS는 1ug/mL이고, LPS보다 높게 OD값이 나온거는효과가 없다고 판단했습니다.

그리고 STANDARD랑 비교했을때 CONTROL은 100pg/mL, LPS는 200pg/mL으로 비교됩니다.

그럼 HT-29가 부착세포인데 떠있는것이 발견되서 세포 상태가 이상하다고 판단 되는걸까요?

대왕개구리SPEED  |  2022.03.17   

- LPS보다 높게 OD값이 나온거는효과가 없다고 판단했습니다.

: sample이 효과가 없다면 오차범위에서 LPS와 유사하게 나와야 하는데 

LPS 단독 처리보다 높게 나온것 같습니다.

 

-실험 군 별 몇개를 측정했나요?

 

- 시료 처리 전 cell 상태, CON group, LPS group, LPS + sample group의

cell 상태가 어떻나요?

 

- 특히 CON group의 20H 후 cell 상태가 어떻나요?

 

- LPS 처리했을 때 IL-8의 양이 너무 적게 나온것 같습니다.

han_sanghee_@naver.com  |  2022.03.17    

CELL상태는 계대시에는 뜨는 세포가 보였는데 96WELL에 SEEDING후에 관찰 하면 뜨는 세포는관찰되지 않았고, 샘플과 LPS처리 후에도 뜨지 않았습니다.

N=3로 실험 진행했고, MTT상에서도 세포 독성이나 이상은 없었습니다.

그리고 HT-29세포주가 암세포주인데 기본적으로 가지고 있는 IL-8이 있어서 높게 측정되는지 궁금합니다.

아니라면 평균적으로 실험을 진행할때 CONTROL OD값이 어느 정도 나와야 믿을만한 수치일까요? 

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