실험 Q&A Cell Biology > Cell lysis/Apoptosis
3T3-L1에서 RNA 추출방법
레벨1 삶은달걀 (대학원생)
안녕하세요. 이번에 처음으로 Cell에서 RNA를 추출하게 되어 구체적인 Protocol을 만들어야하는데, 모르는 사항이 많아 여쭤보게 되었습니다 ㅠ
Maturation까지 완료된 12 well plate에서 RNA를 추출한 후, 최종적으로는 PCR을 돌릴 예정입니다. 흔히 논문에는 Trizol을 많이 사용한다고 적혀있던데, 1) plate에 바로 trizol을 처리하는 것인지, 아니면 계대와 같은 과정으로 Typrsin-EDTA 처리를 한 후 media로 reaction stop후 trizol을 처리하는 것인지 감이 잡히지 않습니다. 2) 또한, trizol은 cell 몇당 얼마만큼 넣는것인지도 구체적으로 알려주시면 감사드리겠습니다.
RNA 추출 키트의 경우 Invitrogen kit를 사용할 예정인데, 설명서에 따르면 lysis buffer를 이용하라고 되어있습니다. 3) 이 또한 trizol 처리를 한 후에 lysis buffer를 이용하는 것인지, kit를 사용할 경우 trizol 처리를 하지 않고, plate에 lysis buffer만 처리하는지도 궁금합니다...
처음 실험을 진행하는 부분이라 미흡한 점이 많습니다,, 답변 부탁드립니다 ㅠㅠ
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