실험 Q&A > Buffer/Reagent
luciferase lysis가 잘안되는것같아요 ㅠㅠ도와주세요 ㅠㅠ제발 ㅠㅠ
레벨2 뭉치쭈꾸 (대학원생)
제가 HEK293, A549,L132,HeLa등 여러가지 cell line들을 luciferase실험을 하는데요
똑같은 버퍼로 라이시스 시켰는데
HEK293은 결과값이 잘나오고
나머지 Cell들은 control이랑 실험군이랑 값의차이가 아예 없습니다..
교수님도 이유를 모르시겠다고.. 선배도 이문제로 애먹고있고 ㅠㅠ랩전체가 애먹고있어요..
버퍼 조성을 바꿔봐야 하는건지.. 아니면 프로토콜 자체에 문제가 있는건지 막막합니다.
저희랩 luciferase protocol
1.1x PBS로 2번 wash
2.lysis buffer 만들어서 12well plate 기준 lysis buffer 150ul씩 넣어줌
(DW, 1M tris pH7.5 , DTT, Triton x 100)
3.1hr rocking
4.10ul lysate + 40ul substrate
5.측정
이렇게하는데.. 왜 다른 셀들은 값이 안나올까요..? ㅠㅠ도와주세요 ㅠㅠ제발 고수님들 ㅠㅠㅠ
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