실험 Q&A Immunology > Immunofluorescence
안녕하세요 FACS를 찍는데 cell down이 안되서 문제입니다 도와주세요
레벨1 엄선우 (대학원생)
안녕하세요 cell profiling을 위해 FACS를 찍고 있습니다.
제가 하는 방식은 cell을 fixation한뒤 1st antibody처리 후 2nd antibody- FITC를 처리하고있습니다.
여기서 5000g로 3분 centrifuge 하는데 1st ab까지는 cell down이 잘 되어 pellet이 되는게 보이는데 2nd를 처리하면 pellet이 안생기네요.. 10000g이상으로 돌리면 cell이 데미지를 받아 실험에 영향이가서 7000g 까지는 해봤는데 cell down이 안됩니다.
fixation한지 6개월이상된 cell에서 보통 이런 현상이 일어나고 1개월 미만 cell에서는 이런현상이 일어나지 않습니다.
혹자는 2nd ab의 FITC의 charge가 영향을 줘서 cell에 붙은 형광끼리 같은 charge라 안붙는거일수도 있다고 하는데 이유가 무엇인지, 해결방법좀 알려주세요 ㅠㅠ
그리고 fixation한 cell을 저는 얼린뒤 녹여서 사용하는데 몇번정도 얼렸다 녹였다 할수있는건지도 아시는분 같이 부탁드리겠습니다ㅠㅠ
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