실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
WB protein preperation 시 cell harvest 질문드립니다.
레벨2 셀러문 (대학생)
안녕하세요 protein extraction 목적 cell harvest 질문드립니다.
일단 harvest protocol은 이러합니다. (최대한 icing 상태에서 진행)
1. media -> conical tube (dead cell까지 보려고 합니다.)
2. pbs washing 후 -> conical tube
3. 2X trypsin-EDTA 처리 후 incubator 3min
4. media로 cell 모아 -> conical tube -> centrifuge 1500rpm 5min
질문 입니다.
1. trypsin은 아무리 washing을 잘해줘도 잔존하여 단백질을 깬다는 글을 봤는데 이 글과 같이 protein extraction 목적이면 무조건 scraper를 사용해야 하나요?
2. trypsin 처리 후에 media로 cell을 아무리 모아도 완벽히 plate에서 tube로 이동시킬 수 없습니다.. 이 loss가 OD값에 영향을 많이 미치는지 궁금합니다.
(최대한 plate에서 tube로 옮길 수 있는 tip 부탁드립니다.)
3. trypsin,FBS 제거를 위해 PBS washing을 두번 하는데 이때 loss가 많이 생길까요?
답변 부탁드립니다.
항상 감사드립니다.
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