실험 Q&A Plant Biology > Plant Tissue Culture
캘러스 유도 배지 오염에 관해 질문 있습니다.
레벨1 loopcha (대학생)
NB 배지를 이용하여 벼 종자에서 캘러스를 유도하려고 하는데 벼 종자를 배지로 옮기면 항상 벼 종자 주변이 세균으로 오염되어 첫번째 단계에서 계속 멈춰 있습니다.
NB배지, 살균 증류수 전부 autoclave를 통해 멸균하고 클린 벤치에서 작업합니다. 사용하는 핀셋, 유리병 전부 autoclave 돌린 후 클린벤치에서 화염 멸균하여 사용합니다. 쌀 종자는 70% ethanol로 일 분, 1.5% sodium hypochlorite와 tween 20 혹은 triton X-100으로 30분 살균하고 증류수로 washing 후 종자를 배지에 놓습니다. 다만 마지막에 washing하는 증류수가 마르지 않은 채로 배지에 올립니다. 교수님도 원래는 filter paper같은 걸로 수분을 날리고 배지로 옮긴다고는 하셨는데 그냥 washing하고 바로 옮기라고 하셧습니다.
배지는 쌀 종자를 옮기지 않은 것은 일주일 지나도 세균 오염이 없는데 종자를 옮기면 계속 오염이 생깁니다. 제 짧은 식견으로는 세균으로 오염되는 영역이 항상 멸균 증류수가 퍼진 영역인데 멸균 증류수가 문제일까요?
Bio마켓 프리미엄