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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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질문 cell counting 계산 검토 부탁드립니다ㅠㅠ
뒷다리데이지꽃(과기인)  | 2022.02.05 23:11

총 부피 21 mL의 1 x 10^4 cells/well을 150 uL씩 96-well plate에 분주하고자 합니다. 제가 계산한 공식을 서술할테니 검토 부탁드립니다ㅠㅠ

cell counting은 10 uL 넣어서 현미경으로 관찰했습니다.

 

1. cell counting 결과: 120 개 (사방면 counting 결과입니다.)

2. counting 결과의 cell 수 (참고로 trypan blue 사용하지 않았으므로 희석배수를 생략했습니다) = 120 x 1/4 x 10^4 = 30 x 10^4 cells/mL

3. 만약에 100 uL씩 분주하면, 10 x 10^4 cells/mL임

4. 필요한 cell 수 / counting 된 cell 수 = 10 x 10^4/30 x 10^4 = 0.333 mL임. 즉, 0.333 mL의 cell을 1 mL로 mass up 하면 10 x 10^4 cells/mL임.

5. 3.33 mL cell을 10 mL로 mass up 하면 100 uL씩 분주했을 때, 10 x 10^4 cells/mL임.

6. 그런데 3.33 mL cell을 15 mL로 mass up 하면 150 uL씩 분주했을 때도 10 x 10^4 cells/mL임.

7. 필요한 부피는 21 mL이므로 6 mL를 더 계산해야함. 6번으로 비례식을 세우니 1.332 mL cell을 6 mL로 mass up 하면 150 uL씩 분주했을 때도 10 x 10^4 cells/mL임.

8. 따라서, 4.662 mL cell을 21 mL로 mass up 해야 150 uL씩 분주했을 때도 10 x 10^4 cells/mL임.

#cell counting
 
#cell culture
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리무광  |  2022.02.05   

well 당 부피 150ul 해서 1 X 10^4 cell씩 분주하고 싶다는 말씀이시죠? 
분주용액의 총 부피는 21ml고

답은 '거의' 맞아보이나 계산과정이 쓸데없이 복잡하네요

1. 카운팅으로 구한 원액의 농도 3 x 10^5 cells / ml

2. 분주용 용액 농도 X:

X * 0.15 = 10^4
X = (2/3) * 10^5 cell/ml

3. 분주용 용액에 필요한 cell 숫자 = 농도 * 부피 = X * 21 = 1.4 * 10 ^6

4. 원액에서 덜어야 하는 부피 = 1.4 * 10^6 / (원액 농도= 3*10^5) = 4.6667 

5. 4.6667 덜고 total 21까지

혹은 

1. 카운팅으로 구한 원액의 농도 3 x 10^5 cells / ml

2. 21 ml에서 150ul로 분주하면 총 140번 분주가능 세포 1만을 140번 분주할 양이므로 필요한 세포 총량은 140만 

3. 140만/원액 농도하면 = 4.6667

 

 

계산  |  2022.02.06    

# Trypan blue는 최소한의 live dead cell 확인을 위해 사용하는 습관을 들이세요.

# 필요량을 정한 후에 계산하는 것이 편하고, loss도 감안하여 넉넉하게 만드는 것이 좋습니다.

# 21ml이라는 것은 140 well에 분주를 한다는 의미라고 생각하겠습니다.

# loss를 감안하여 150 well 분량을 계산해보겠습니다.

 

1x10^4cells씩 150well에 넣으려면

1x10^4 x 150well = 150x10^4 = 1.5x10^6 cell이 필요합니다.

counting 결과는 3x10^5/ml 이므로 5ml의 cell이 필요합니다.

well당 150ul씩 넣으니까 total volume은 150well x 150ul = 22.5ml 입니다.

5ml cell + 17.5ml media 만든 후 150ul 씩 aliquot 하면 됩니다.

 

도움이 되었길 바랍니다.

대왕개구리SPEED  |  2022.02.06   

- 가지고 있는 cell 농도 : 30 x 10^4/ml

 

- seeding cell 농도 : 1 x 10^4/150ul = 6.67 x 10^4/ml

 

- 30 / 6.67 = 4.5배 희석

 

- 가지고 있는 cell을 4.5배 희석해서 150ul 씩 분주하면 1 x 10^4/well이

들어갑니다.

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