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질문 엑소좀 isolation 할때 배지
알세이비어(대학생)  | 2022.02.02 02:00

엑소좀을 isolation 할때

FBS와 AA가 안들어간 basal media만 있는 배지로 배양한 세포를 회수하여 엑소좀을 추출하잖아요?

부유세포는 그냥 파이펫에이드로 회수하여도 상관없습니다만,

그럼 만약에 adhesive 한 세포의 경우에 회수를 어떻게 하나요?

 

계대배양 할때는 기존 배지를 전부 석션하여 버리고, tE를 2~3ml 쳐주어 떼어내는 것으로 알고있는데요.

혹시 엑소좀 isolation 할때도 1)배지 석션 후 2)tE 처리하고 3) contrifugation하여 상층액 전부 빨아내고 4) basal media 넣어서 파이펫팅 해준뒤에 5) 다시 순차적으로 contrifugation 해서 엑소좀 추출하나요?

만약 그렇다면 2),3) tE 처리한거 contrifugation 하는 과정에서 상층액에 엑소좀 많이 섞여있을텐데 이걸 버리나여?? ㅠㅠ

 

자세히 좀 알려주심 감사드리겠습니다 ㅠㅠ

#엑소좀
 
#isolation
 
#exosome
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
알OOOO  |  2022.02.02   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
FBS는 10kd mw cut filtration 혹은 100,000 xg에서 24시간 ultra centrifugation 해서 사용하고 (부자 랩이면 팔기도 합니다. Exosome free fbs) AA 는 특별한 조건을 만드시는거 아니면 넣고 합니다. FBS 없는 미디어는 오래전에 쓰던 방식입니다. 세포에 스트레스를 주기도 하고 모으는데 시간도 오래 걸려서 요즘엔 잘 안합니다.
엑소좀은 세포 외부로 방출되기 때문에 세포가 아닌 미디어만 추출 합니다. 떠다니는 세포는 원심분리로 세포를 제거하고 붙에있는 세포는 미디어만 모아서 원심분리로 세포를 제거합니다. TE 처리 과정이 없습니다.
알세이비어  |  2022.02.02   

헉 정말 감사합니다 ㅠㅠ 한번에 이해되었습니다.

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