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질문 INS-1E cell line 배양 중 cell이 떨어지는 문제
알고고간다(대학생)  | 01.25 17:45

INS-1E cell line을 키우고 있습니다. 

조성은

RPMI 1640 에

sodium pyruvate 1mM

HEPES 10mM

FBS 10%

beta mercaproethanol 50uM 로 사용하고 있습니다.

 

계대를 하면 100파이 디쉬에서 2~3일은 잘 자라다가 테두리가 살살 뜨기 시작하면서

1~2일 사이에 반 정도가 붕 하고 뜹니다.

 

세포가 엄청나게 꽉꽉 차있는것도 아니고 

슬슬 계대하면 되겠다 싶으면 세포가 떠 버리니 너무 답답하네요.

오염 문제는 아닌것 같습니다.

혹시 INS-1E cell을 키우시는 분들 이런 경험을 해보신적이 있으신가요??

 

#ins
 
#culture
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YY  |  02.21 15:22   

안녕하세요!

저도 지금 Insulin 관련 연구를 하고 있어서 Ins-1E cell 로 실험 진행하고 있습니다

RPMI1640+10%FBS+1%PS+50uM 2-mercaptoethanol 배지 조성사용하고,

100pi dish에서 2일마다 MC, 3일주기로 subculture하고있습니다

(원래는 일주일에 한번정도만 해도 된다는데 실험진행상 seeding 타이밍때문에 cell number를 늘려서 조금 변형해서 하고있긴합니다. 약 70% 이상정도 차면 subculture하는 것 같네요)

보통 cell 자라는 속도가 빠르다고 해서 dilution을 많이 한다고 하는데..

사실 저도 제가 서툰것인지 3일정도면 적당히 1:3~1:4 정도로 subculture하는 것 같습니다.

 

INS-1E cell 자체가 퍼지면서 자라 예민한편이기도 하고 약하다고도 하긴하는데...

저도 지속적으로 1/10정도는 dish에서 뜨고 나머지만 붙어있는 형태인 것 같습니다. 붙은 cell들로만 Insulin 뽑아봤을때 정상적으로 잘 나오긴합니다

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