실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > Purification/Isolation
RNA를 trizol방식으로 추출한 후 농도측정했는데 너무 농도가 낮아요,,
레벨1 디구지키미 (대학생)
RNA를 trizol방식으로 추출한 후 농도측정했는데 너무 농도가 낮아요,,
제가 세포를 seeding하고 trizol로 RNA를 추출했는데 농도가 항상 낮게나옵니다,, 그리고 흡광도 값이 몇몇 샘플은 음의값이 나와요,, 예를 들어 하나의 샘플의 흡광도 값이 A230=0.736A / A260=-0.174A / A280=-0.234A / A320=-0.301A 이렇게 나옵니다..
1. 흡광도가 음의 값이 나오는 이유와 이 값이 의미하는것이 뭔가요?
2. 흡광도 A230, A260, A280, A320의 값이 어느정도 나와야 이상적인가요?
3. 제가 뽑은 RNA들이 대부분 260/280DML RKQTDL 1.8보다 낮아 단백질 오염 가능성이 큰 것같은데 chroloform처리 후 centrifuge하고 상층액만 뽑을 때 최대한 단백질이나 불순물 오염이 되지않게 유의했는데 그밖에 유의할 점이 뭐가 있나요?
4. trizol를 seeding한 well에 처리할 때 저는 1분안에 조심히 2번 정도 pipetting하여 E.tube에 옮기는데 세포가 충분히 깨지지 않는 조건인가요..?
RNA뽑는데 농도도 낮고 degradation도 있는 것 같아 유의하며 실험해도 항상 제자리걸음입니다ㅠㅜㅠ 고수님들 도와주세요 ㅠㅜ
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