실험 Q&A Cell Biology > Differentiation/Proliferation
3T3-L1 cell 분화 관련 ㅠ
레벨1 도덕배 (대학원생)
안녕하세요 저는 석사 이제 3학기차인 대학원생입니다..
저희 실험실은 3T3-L1 지방세포를 가지고 주로(거의) 실험을 하고 있습니다.
프로토콜도 나름 잘되어있고, 실험 setting도 잘 되어있습니다.
하지만, 갑자기 잘 되던 지방세포분화가 갑자기 10월달 부터 되지 않습니다..
저는 6월달 까지도 분화가 거의 80~90% 정도로 잘 됐어서 프로토콜에 문제가 생긴 것은 아닌 것 같습니다.
10월달부터 안돼서 Ins, Dex, IBMX, FBS, BCS 등 분화관련 혈청들을 다 새것으로 바꾸어도 보았는데 마찬가지로 지방세포 분화율이 좋지 않습니다. (30~40% 정도)
세포의 passage도 15아래로, 21년도 3월달에 ATCC에서 구매해서 사용하고 있었습니다..
아무리 관련 물건들을 다 바꿔도,.. 예전만큼의 분화율이 나오지 않습니다..
과제 마감이 코앞인데,. 이걸 어떻게 해야할까요.. 제 손의 문제일까요..?
나름 생각해 본 것이 세포 분화를 진행할 때 Day 0을 처리할 시기가 중요한 것 같은데 저희는 24well에 세포를 seeding한 뒤 꽉 채우고 세포들이 붙어서 동그래지면 그 때 Day 0 을 처리합니다. 이 시기가 잘 못 되었을 수도 있을 것 같아서 Day 0을 처리할 때 꽉 채운 뒤 1-2일 정도도 더 유지시키고 MDI를 처리하였는데, 마찬가지로 분화율이 안좋습니다..
과장 좀 보태서 40개의 plate정도를 분화시켰는데 매번 잘나오던 애들이 안나오니 죽을 맛입니다..
세포 고수님들 도와주세요.. 어떤 것을 또 바꾸면 될까요..? 부탁드립니다.
첨부파일은 예전 분화한 사진과 지금 분화시킨 사진을 비교한 pdf입니다.
보시고 말씀해주세요...
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