- DNA양이 2개월전 보다 적게 loading되어서 minor band가 적은지는

확인하기 힘듭니다.

- 몇 ml 배양액에서 추출해서 몇 ul에 녹여 몇 ul 전기영동한 양인가요?

- 어떤 제한효소로 자른건가요?

- 다른 제한효소를 사용한건 없나요? 

- DNA양이 2개월전 보다 적게 loading되어서 minor band가 적은지는

확인하기 힘듭니다.

- 몇 ml 배양액에서 추출해서 몇 ul에 녹여 몇 ul 전기영동한 양인가요?

: 3mL cell down 후 20ul로 추출하여 4ul loading 했습니다.

 2개월 전과 현재 모두 동일합니다.

gram positive 균이라 lysozyme 추가 후 37℃ 처리하는 단계를 추가했습니다.

다만, 2개월 전에는 lysis 단계에서 10분마다 tickling을 진행했고

이때문에 농도는 현재보다 높았으나 minor band가 많이 확인되어

현재에는 lysis 단계에서 tickling 없이 방치 후 다음 단계를 진행했습니다.

오히려 tickling을 하여 농도를 높이는게 더 좋을까요?

- 어떤 제한효소로 자른건가요?

: Nru I으로 처리했습니다!

- 다른 제한효소를 사용한건 없나요?

: 2개월 전에는 없어서 처리하지 못한 효소를 이번에 처리해보았는데

  그것도 band가 너무 흐릿하여 첨부하지 않았습니다!

plasmid 자체 농도가 너무 낮아서 저렇게 나온걸까요?

제가 생각해봤을 때는 현재 처리했을 때 2개월 전보다 DNA 양이 적은데

제한효소 처리 시 덜 잘린것처럼 남아있는 band가 나타나는 이유는 뭘까요?

오히려 2개월 전에 처리한 건 전부 cutting된 것 같아 의문이 듭니다ㅠ

- 3ml를 cell down하면 균체양이 상당히 많을건데 1개 tube에 추출하면

추출 수율이 안좋을 겁니다.

- 현재 plasmid도 양을 올리면 2개월 전과 같이 나올것으로 보입니다.

- 반응상의 문제이기 때문에 제한효소 처리 후 안잘린 band가 남아있는

경우는 종종 있습니다.

- 제한효소 분석 시 우선 plasmid양이 분석가능할 정도는 되어야 좋습니다.

- 2개월 전 data가 잘린 것으로 보이지 않습니다.

- 우선 plasmid를 잘 분리한 후 가능하면 각 plasmid를 각각 분리해서

제한효소 분석하는 것이 좋을 것 같습니다.

- 3ml를 cell down하면 균체양이 상당히 많을건데 1개 tube에 추출하면

추출 수율이 안좋을 겁니다.

: cell down volume을 줄여서 진행해보도록 하겠습니다!

- 현재 plasmid도 양을 올리면 2개월 전과 같이 나올것으로 보입니다.

: 현재 plasmid도 농도가 올라가면 minor한 band가 함께 확인될거라는 말씀이실까요?

- 반응상의 문제이기 때문에 제한효소 처리 후 안잘린 band가 남아있는

경우는 종종 있습니다.

- 제한효소 분석 시 우선 plasmid양이 분석가능할 정도는 되어야 좋습니다.

- 2개월 전 data가 잘린 것으로 보이지 않습니다.

: uncut plasmid를 임의로 1번, 2번이라고 하였을 때

  1번과 2번을 모두 1-cut 할 수 있는 band로 처리한건데요

  (linear 상태로 정확한 size 확인을 위해)

  uncut보다 더 큰 위치에 떠서 cutting되었다고 생각했는데

  잘리지 않았다고 보시는 이유를 여쭤봐도 될까요?ㅠㅠ

- 우선 plasmid를 잘 분리한 후 가능하면 각 plasmid를 각각 분리해서

제한효소 분석하는 것이 좋을 것 같습니다.

SPEED님 도움 주셔서 감사합니다ㅠㅠ