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레벨2
Han_
(대학원생)
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21.12.09 12:52
네 각 20-30분씩 굳히는 시간 뒀어요!
제 기준 버퍼 레벨이 좀 낮아보입니다.
그리고 젤에 공기방울이 들어갔을 수도 있어요 쭉 끌리는거 보니..유심히 보세요
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c2319291@naver.com
(비회원)
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21.12.09 13:03
스마일링 현상이라하면 보통 한쪽으로 기우는거나 그런것같은데 그럴경우 러닝버퍼가 세진 않는지 꼼꼼히 확인해보시고.. running gel 은 만드실때 잘 섞으셨겠죠...? 버블이랑은 없는지 확인도 하셨구요?
- running buffer로 gel 위가 노출되지 않았기 때문에 buffer 높이는 문제
없습니다.
- gel이 굳을 때 균일하게 굳지 않은 것으로 보입니다.
- gel 또는 buffer가 조금 지저분한것으로 보입니다.
marker를 loading한 well 윗면에 파란색으로 뭔가 남아있습니다.
원래 loading한 well에는 아무것도 남지 않고 보이지 않는 것이 정상입니다.
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레벨2
Han_
(대학원생)
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21.12.09 13:09
gel만들때 tube에서 혼합 후 인벌팅해준 후 제작합니다 seperating gel 기포는 isoprophenol을 올려주면 없어지는 걸로 아는데 다른 기포가 있을까요?
- gel의 기포는 눈으로 보이기 때문에 나중에 확인하면 되고 균일하게 굳지
않았다는 것은 전기영동 결과를 보고 확인가능합니다.
- gel polymer가 굳을 때 부분적으로 농도 구배가 생긴다는 뜻으로 농도 구배가
생긴 곳을 단백질이 지나가면 band가 일직선으로 나오지 않습니다.
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레벨2
Han_
(대학원생)
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21.12.09 13:34
러닝버퍼를 2회에 1번 제작해서 사용중인데 매번 새로 제작해서 사용해야 하는건가요? 균일하게 굳게하기 위해 인벌팅말고 볼텍싱을 진행해도 되나요??? 젤은 조성표에 따라 제작중인데 조성표에 문제가 있는지 확인 한번 요청드립니다
- running buffer는 매번 만들지 않고 stock을 만들어 1X로 희석해 항상
fresh하게 사용하는 것이 좋습니다.
buffer 문제 때문이 아닌가 보입니다.
- 1회 전기영동을 하면 gel안의 buffer가 아래로 내려와서 running buffer
조성이 변합니다.
- gel mixture을 inverting하면 cap에도 묻고하는데 독성있는 물질이기
때문에 안좋을 것 같고 vortexing을 짧게하는 것이 좋을 것 같습니다.
- AP를 현재의 80% 정도만 넣어서 굳혀 보세요.
gel은 절대 빨리 굳히는 것 보다 늦게 굳히는 것이 좋습니다.
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레벨2
Han_
(대학원생)
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21.12.09 13:55
처음해보는 실험에 혼자하는거라 매번 막막하네요...😥
한번 말씀해주신대로 진행해보겠습니다 정말 감사합니다~🙇🏻♀️
gel 만들 때 사용하는 buffer와 running buffer의 pH 확인해보세요.
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레벨2
Han_
(대학원생)
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21.12.09 14:30
gel은 시판제품에 sds와 smad aps를 혼합해 사용중이라 버퍼는 확인해봐야겠네요ㅠ 감사합니다!
버퍼 pH문제는 첨부 사진과 같은 현상이 나오지 않고 running buffer는
pH문제가 아니라 재 사용 문제이기 때문에 fresh하게 사용해야 합니다.
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레벨2
Han_
(대학원생)
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21.12.09 14:59
ph8.3으로 맞춰둔 버퍼 현재 측정값으로 8.10나오고 값이 천천히 올라가는 느낌인데 이정도면 큰 영향이 있을까요...?
8.13까지 올랐습니다.
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지나가다
(비회원)
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21.12.13 17:27
오래된 running buffer 사용
fresh한 걸 쓰는게 좋아요~~~
180 Volt에 1시간 정도도 잘되요,,,