실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
IPTG induction 관련 질문입니다.
레벨4 이드 (대학원생)
안녕하세요.
low copy plasmid에서 protein 발현실험을 진행중입니다.
IPTG 처리 후에 target protein이 발현이 SDS로는 확인되지 않아서..
Western할 Ab는 없고..
RNA를 확인하기 위해 RT-PCR을 진행하였습니다.
RNA양이 평소보다 IPTG를 처리하였을 때 7배..정도? 증가하였는데
low copy라도 7배 정도..? 증가하는게 맞을까요?
lacI가 같이 있는 plasmid라서 논문 protocol에 따라 1mM 농도로 처리하였고,
이전에 troubleshooting 하려고 0.5, 0.1mM 농도에서도 진행해보았었습니다.
IPTG 처리를 해도 16S (CT값 8정도) 보다 낮게 target gene (16정도..) RNA양이 확인되어 문의드립니다.
replication origin은 RSF1010 입니다. broad host origin 이고, copy수는 대략 10~12 정도 되는걸로 알고있습니다.
이런 경우 IPTG를 새로 만드는게 맞을까요?;;
아니면 정상적으로 단백질은 만들어지고 있다고 보는게 맞을까요?
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