감수성 조사를 하시려 하시는군요
감수성 조사를 하는 방법은 여러가지 변형이 있을 수 있습니다.
가장 보편적인 것은 먼저 agar plate에 cell을 깔아야 합니다.
cell을 깔기 위해서 1.5% agar plate (bottom agar)를 준비하세요
그리고 0.5% water agar (top agar)를 준비하세요
이 water agar 3ml을 cap tube 등에 넣고 적당한 온도가 되면 (약 45도 정도) 배양한 세포 적량을 넣으세요 (세포의 농도는 일정친 않지만 대략 OD0.2-0.6 정도짜리 0.1ml 정도 넣으시면 됩니다)
바로 vortexing하시고 상기의 1.5% agar plate에 부으시면 됩니다.
그러면 약 30분 후에 배지가 굳을거예요
그리고 top agar위에 멸균된 핀셋을 이용하여 disc를 놀려놓으세요
이 disc 위에 약 20-50 ul 정도를 점적하세요
점적하는 양은 disc의 크기에 따라 다릅니다.
disc가 촉촉이 젖을 정도면 됩니다.
너무 많아서 disc 밖으로 흘러나오면 좋지 않습니다.
그런 후 상온에서 잠시 놓아둔후 배양을 하게 되면 다음날 disc 주변에 clear zone이 형성되어 있을 겁니다. 이 zone의 크기가 클수록 감수성이 큰 것이 됩니다.
농도는 중요한 것이 아닙니다.
님께서 stock 농도가 높은 것을 쓰시면 그만큼 zone이 커질 것입니다.
너무 zone이 커서 비교하시기 곤란한 경우 stock 농도를 줄이시거나 점적하는 양을 줄이시면 됩니다. (실험이 한 번에 되기는 쉽지 않습니다. 2-3번 하셔서 적당한 농도를 본인이 직접 아셔야 합니다)
두 개의 plate를 서로 비교하시게 되면 감수성의 차이를 아실 수 있으실 겁니다.
좋은 결과 꼭 내시기 바랍니다.
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