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KDR 학술부
(비회원)
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09.02.06 17:15
혹시 Nikel coulmn 사용 시에 Native한 조건으로 purification을 진행하였는지
확인해 보시기 바랍니다. Native 한 조건으로 purification을 진행하셔야
function assay가 가능할 것 같네요.
그리고 단백질이 활성을 잃어 버릴 수 있는 조건은 너무 많기 때문에
어떻게 설명 드릴 수 없을 같네요.
부디 좋은 결과 얻으시길 바랍니다.
enzyme이 제 활성을 나타내려면 사차구조가 굉장히 중요합니다.
아시다시피 bacteria내에선 post translational modofication이 많이 일어나진 않지만
eukaryotic cell은 많이 일어나죠,
원하지 않는 부분에 이상한 작용기들이 붙으면 단백질 구조가 좀 달라질거 같은데요
만약 특정 enzyme이 dimer 구조를 이루어만 활성을 나타내는데
post-translational modification에 의해 원래의 사차구조를 이루지 못하게되면
활성은 나타나지 않겠죠.. 사차구조까지 영향을 받지 않더라도
활성을 나타내는 key residue에 post-translational modification이 일어나면 이것 자체 만으로도 활성 저해가 일어날 수 있겠죠~
amino acid sequence확인해 보시고 glycosylation같이 eukaryotic cell에서만
일어날 수 있는 post-translational modification이 일어날 가능성이 있는
서열이 있는지 확인해 보시고,, 아마 대부분 post-translational modification이 일어났는지 확인하는 실험이 있을 겁니다. 시도해 보시면 좋을 거 같네요.
사차구조 확인은 ...
Native Page를 걸어서 bacteria에서 발현한 것과 eukaryotic cell에서 발현한 것의
사차 구조가 같은지 (monomer인지.. multimer인지..) 다른지 확인해 보시는 것도 좋을 것 같구요