[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
성균관대학교 삼성융합의과학원
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
BioLab 최수진 교수
전체보기 안전점검 LABox
 전체 > Immunology > Immunophenotyping
조회 1247  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 FACS 보정 방법
알Ladybug(과기인)  | 2021.08.16 20:29

안녕하세요,

FACS를 이용해서 마우스 혈액, 비장 에서 CD45-PE, CD3-FITC, CD19-PC5.5 항체를 붙여서 면역세포 분석을 하려고 합니다.

항체 2개만을 이용할때는 게이팅과 보정을 위해 3개의 Figure를 생성하였고  FSC-H/SSC-H, FSC-H/FSC-A, FIT-C-H/PC5.5-H로 구성하였습니다.

1. 그러면, 항체가 3개 이상일때는 보정을 위해서 어떤 X,Y 조합으로 figure를 생성해야 할까요? 특정 형광은 항상 X축에 사용되는 건가요?

CD45-PE/CD3-FITC, CD3-FITC/CD19-PC5.5, CD19-PC5.5/CD45-PE 같이 세개 figure에서의 보정만 필요할까요?

2. 각 항체들은 FL1,2,3,4에 해당되는데, 이것은 무엇을 의미하나요? FL1에 해당되는 항체 두개는 보정에 필요한 figure에서 X Y값에 놓일 수 없는건가요? 

3. 비장에서는 CD19-PC5.5가 붙어서 B세포가 확인되는데, 혈액세포에서는 보이지가 않아요. RBC lysis가 B세포에 유독 손상을 주는지, 혹은 CD19-PC5.5의 형광정도가 약해서인지 궁금합니다. 형광때문이라면 이것을 높이기 위해서 형광염색의 농도와 시간을 늘려야 하는지도 궁금해요.

경험있으신 분들의 조언 부탁드립니다. 감사드려요~~

 

#유세포 분석기
 
#면역염색
 
#항체
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리Monochrom  |  2021.08.17   

Gating strategy는 연구자마다 상이합니다만, 제가 이용할 때는 

글쓴이분께서 쓰시는 mAb 조합이라면 

      x-axis/y-axis

(1) FSC-A/SSC-A (A가 아닌 H도 무방합니다.)

(2) FSC-H/FSC-A

(3) CD45/SSC-A

(4) CD3/CD19    이렇게 4가지 plot으로 구성합니다. 

이 경우에 compensation은 말씀하신 3가지 조합에 해당하는 경우를 수행하시면 됩니다. 

FL1,2,3,4는 그냥 각각의 형광 채널을 말하는 것으로 일반적으로 같은 FL에 해당하는 다른 형광조합은 잘 사용하지 않습니다.(compensation을 tight하게 하면 구분이 될 수도 있지만 권장하지는 않습니다)

spleen에서 B cell이 보이는데 blood에서 B cell이 보이지 않는 것은 RBC lysis 때문은 아닐 것 같긴합니다만..(spleen도 RBC lysis를 해주지 않나요?) 

한번 RBC lysis 후 현미경을 통해 blood내 cell이 죽진 않았는지 확인해보시면 좋을 것 같네요. 이론적으로 spleen에서 CD19이 찍혔다면 같은 채널로 blood에서 찍혀야하는데 voltage값이나 gain값을 조절하여 positive한 population이 나타나는지 조절해보시는 것도 한 방법입니다. 

mAb는 보통 1/100 정도가 되도록 처리하거나 intensity가 너무 높을 경우 더 희석하기도 하며 Ag만 제대로 존재한다면 Ab는 1분만 처리해도 결합되어 형광이 detection됩니다~ 

답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
Faustovirus Capping Enzyme은 더 안정적으로 더 많은 양의 Cap-0 전사체를 얻을 수.. (12.28까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
신종감염병 대응 mRNA 백신, 치료제 합성은 NEB 의 GMP-grade IVT 시약으로 (12.31까지)
JW크레아젠 JW크레아젠
JW크레아젠 사이토카인 Event! (10.23까지)
바이오닉스 바이오닉스
[TECAN No.1 한국공식대리점] TECAN Automation / Liquid handler / Mic.. (12.31까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
3D CellCulture CO2 incubator CLINOSTAR 20% 할인행사!
JW크레아젠 JW크레아젠
JW크레아젠 Thermo 기초장비 Event! (10.23까지)
최근등록   더보기 >
전기영동실험을 위해 아가로스 겔을 만들려고 하는데…   10.03
고체배지 이용 내성세균 관찰   10.03
BLAST에서 치환행렬이 permutation matrix 과 관련이 있나요?   10.02
qPCR 프로토콜 질문   10.02
Gel extraction loading 농도   10.02
mini prep 결과가 이상해서 여쭤봅니다.   10.01
HPLC/UV-vis BLANK 문제   10.01
무슨 곰팡이인가요??   10.01
식물 primer 설계 질문 드립니다.   10.01
L-ascorbic acid와 ascorbic acid는 같은 물질인가요..??   10.01
최근답변자 우수답변자
개구리Crucial

앞다리차몬드

개구리안녕난세포야

개구리아이이이잉

대왕개구리강시

알형준팍

올챙이흰털누누

개구리cslee

꽃개구리Applied_Mi..

꽃개구리TX

꽃개구리개그

개구리애니

개구리ryan

개구리G.P.Ts

개구리flu...

개구리Marine

실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아 광고