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R/E처리 후 정제 할 때 loss가 많이 생긴다는 분들이 많습니다.
이런경우 cutting vol.을 늘려서 실험하는 것이 loss줄이는 방법입니다.
1. 멸균수로 300ul vol.-up
2. Add P/C/I 100ul and inverting
3. centrifuge and sup. transfer to new e-tube(Max 270ul)
4. Add 27ul 3M sodium acetate and 300ul iPA
5. store at -80 for 5min
6. centrifuge at 13krpm for 15min
7. 70% EtOH washing
8. dry
9. Resuspension and electrophoresis
최종 수율이 15% 정도밖에는 되지 않는 듯한데, 이는 PC extraction을 하면서 놓친것과 Ethanol 침전을 하면서 놓친것을 포함하더라도 다소 낮은 양이긴 합니다. 보통 50-60% 회수가 가능하지만 (경험적으로), 가능한 모든 과정에서 조심스럽게 해야하며 또한 ethanol침전도 -20C에서 overnight을 전제로 하는 yield입니다.
Spin type을 이용하는 방법은 보통 10분정도면 끝낼 수 있고 회수율도 80-90%정도이며, binding capacity는 제조사에 따라 다르지만 최대 50ug까지 붙을 수 있습니다. Spin-type kit사용을 고려해 보시죠?
60ng/uL * 40 uL = 24,000 ng = 24 ug
아닌가요??
자세한 답변 정말 감사드립니다-
다음번에 할 때 참고해서 해봐야겠네요 ^ㅡ^