실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > etc.
조직에서 뽑은 RNA를 cDNA 만들시.
레벨1 흐으으음 (대학생)
안녕하세요.
molecular를 이제 막 배우고 있는데 주변에 알려줄 사람이 없어서 일단 키워드 검색으로 여러번 찾아보았고 책도 살펴 보고 했는데 제가 정량한 값이 확신이 안 서서 맞는지 확인 하고 싶어 이렇게 글을 작성합니다.
현재 조직에서 RNA를 뽑아 논 상태입니다.
RNA는 RNase-Free Water를 20㎕ 로 정량 후 측정은 nanodrop으로 하고 -80에 보관 중입니다.
이제 cDNA를 만들려고 하는데 제가 사용하려는 kit는 다윈바이오의 1st-strend cDNA Synthesis Kit입니다.
그런데 이 kit에 보면 500ng total RNA 를 이용한다고 합니다.
제가 nanodrop으로 측정한 값이.
name | ng/µL | A250/A280 | A260/A230 | total (㎕) |
1 | sample1 | 166.6 | 2.04 | 1.81 | 20 |
이렇게 나왔을 때 RNA 시료양을 측정하려고 하는데,
1. sample 1 - 500ug/166.6 = 3 ㎕
RNA Template 3㎕
Oligo 1㎕
dNTP Mix 1㎕
DEPC 8㎕
total = 13㎕ 를 만들 때 이렇게 만드는 것이 맞나요?
2. 또는 1ug을 사용 하려면
sample 1 - 1ug/0.1666 = 6㎕ 으로
RNA Template 6㎕
Oligo 1㎕
dNTP Mix 1㎕
DEPC 5㎕
total = 13㎕ 를 만들 때 이렇게 만드는 것이 맞나요?
표준반응 조건 total RNA : 10ng ~ 5µg 이니 두 계산이 다 맞다면 두 계산식 조건 다 사용해도 무방한 것 같은데 맞게 계산 한 걸까요?
고수님들 ㅠ.ㅠ 맞나요?
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