실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Pull-down Assays
RNA-protein interaction에서 salt의 역할
레벨1 넘어려워요ㅜㅜ (대학생)
안녕하세요 RNA와 protein의 interaction을 보고자 RNA pull down assay 실험중입니다. 현재 RNA와 protein을 서로 reaction 시켜준 다음, non specific protein을 제거시키기위해 wash buffer(100mM KCl,20mM Tris...등등)로 wash를 하고있지만 non specificity가 제거되지 않는 것 같습니다. 이에 대한 트러블슈팅으로 salt의 농도를 다르게해주어서 문제 해결을 하려고하는데 Salt의 농도를 높여줘야할까요? 아니면 낮춰줘야할까요? (RNA-protein interaction은 hydrogen bond로 되어있어 이 결합을 단단하게 해주려면 ionic strength가 필요하다는 것까지 알고있습니다. 그래서 salt의 농도를 낮춰주면 정말 온전한 hydrogen bond를 이루고있는 protein만을 얻을 수 잇다고 생각되어지는데 맞나요?) 답변부탁드립니다 선배님들 ㅠㅠ!!!
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