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질문 전기영동 electrolysis 실험 오류
알Heatko(대학생)  | 2021.04.12 11:59

전기 영동실험 결과인데, 

restriction enzyme digest로 plasmid ligation process를 준비하는실험입니다.

이론상 lane2 3 4(pcr1 2 RE1)에 한개의 band만 생겨야되는데, 500~650 사이 band가 자꾸 생기는데 왜이러는걸까요?

사용한 restriction enzyme은 PCR product1&2에 붙지않는 enzyme인데 결과가 자꾸 이렇게나옵니다..

lane 2 3 4는 각각 PCR product1, PCR product2, PCR product 1&2가 들어있고 같은 restriction enzyme을 사용했습니다.

제생각에는 cDNA가 supercoiled 되는현상때문에 이렇게되는게 아닌가싶은데 원래 이정도로 band가 뚜렷하게 보이나요?

upload_image

#전기영동
 
#electrolysis
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2021.04.12   

- 이론상 lane2 3 4(pcr1 2 RE1)에 한개의 band만 생겨야되는데, 500~650 사이

band가 자꾸 생기는데 왜이러는걸까요?

: PCR결과는 이론하고 다른 경우가 상당히 많습니다.

- lane 2, 3, 4는 RE로 자른건가요?

cDNA는 supercoli이 되지 않습니다.

알Heatko  |  2021.04.12   

BamHI 와 HindIII로 잘랐습니다.

cDNA가 아니라 그냥 DNA입니다 제가 글을 잘못적었네요 

대왕개구리SPEED  |  2021.04.12   
안자른 시료는 어떻게나오나요?
알Heatko  |  2021.04.12   

자르지않은 plasmid들은 가장 우측 lane8의 band입니다.

근데 이친구들도 band가 두개로보입니다..

대왕개구리SPEED  |  2021.04.12   

lane 2, 3, 4의 안자른 것을 얘기하는 겁니다.

알Heatko  |  2021.04.12   

Lane 2 와 3 는 각각PCR product 1, 2로 

두개만 다로 electrophorysis를 돌렸을때 위 사진과 동일하게 나옵니다.

(1000bp 보다 조금위랑 650-500 사이에 2개의 band formation)

 

lane4는 PCRproduct 1&2를 각각 8ul씩 섞은것이고요.

 

대왕개구리SPEED  |  2021.04.12   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

첫번째 질문에 lane 2, 3, 4는 RE로 자른건지 물었을 때 답변이 BamHI과 HindIII로

자른거라고 했는데 따라서 lane 2, 3, 4의 안자른 전기영동 사진은 어떻게

나오는지 물었습니다.

안른거나 안자른거나 동일하게 나오면 PCR 조건이 안맞아서 나온 band로 봐야

합니다.

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