실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
western blot을 위한 protein 정량 질문드립니다
레벨2 또잉 (대학원생)
안녕하세요.
Western blot을 위해 protein 정량계산을 다시 확인해보고 있습니다만 이해가 가지 않는 부분이 있어 질문드립니다.
제가 배운 방법으로는 예를들어, RIPA로 lysis한 sample이 50ul가 있는 경우에
50/4(5x sample buffer 를 사용하기 때문에)=12.5ul의 sample buffer를 sample에 넣어주라고 배웠습니다만, 제가 다른 분들의 계산을 찾아본 바에는 이런 계산법이 잘 이해가 가지 않아 질문드립니다. 그러면 총 vol은 50+12.5=62.5ul가 되는데 이게 맞는 방법인가요..?아니면 제가 이해를 잘 못한걸까요....
그리고 BCA정량으로 protein이 3.61ug/ul이 나온 것이 계산되었고, 그래서 총 30ug을 로딩하고 싶기 때문에 30/3.61=8.28ul의 sample을 로딩하는 것이 제가 배운 방법입니다.
이 방법으로 했을때 다른 sample과 베타엑틴의 양이 너무 현저히 차이나서 고민끝에 질문드립니다.........
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