실험 Q&A Chemical biology > Extraction/Concentration
Lysis buffer의 양
Lysis buffer (비회원)
cell을 lysis 시킬 때 최대한 농축시켜 얻고 싶은데, 10cm dish에 lysis buffer를 150uL 정도 넣고 scraper로 열심히 긁어냈는도, protein 얻은 후 정량 결과는 보통 때와 별 차이가 없습니다. (1mg/ml 정도) lysis buffer를 너무 조금 넣으면, cell lysis 자체에 제한이 생기는지요. (게다가 lysis buffer를 150uL밖에 안넣었는데, 30분 incubation후 sample을 수거해보면 250uL 이상이 나옵니다. 이건 왜 그럴까요?) 아는 선배님이 lysis buffer의 양은 별로 중요하지 않다면서, cell을 scaraper로 긁은 후 centrufuge해서 pellet만 남긴 후 lysis buffer를 넣어 보라고 해서 그렇게 해봤는데(lysis buffer 약 100ul per 10cm dish), 결과는 오히려 약간 더 나쁩니다. 이야기가 장황해졌는데, 어쨌든 cell lysis 후 최대한 농축된 protein을 얻고 싶으면 어떻게 해야 할까요. 도움 부탁드립니다. 미리 감사드립니다. 꾸벅
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