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BioLab 박소정 교수
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 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
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질문 Extraction of tissue RNA & Protein 전문 선생님들께,
알21cbnuEM(대학생)  | 2021.03.23 09:01

과학기술분야에 종사하시는 선생님들께,


안녕하세요. 

저는 이번에 과제연구원으로 새로 랩실을 꾸리고 있는 대학생입니다. 

스스로 공부는 하고 있지만 모르는 부분이 많고, 새로 실험실을 거의 혼자 꾸미려다보니 막막하여 전문가분들께 의견을 여쭙고자 글을 적습니다. 

저는 앞으로 실험실에서 C57BL/6 mice를 동물모델로 Tissue (Brain - Cortex, hippocampus, Kidney) 및 혈액 (Whole blood 또는 Serum, Buffy coat) qRT-PCR, ELISA, WB을 통한 생화학적 분석을 하려 합니다. 

단도직입적으로, 선생님들께 여쭤보고 싶은 것은 'Extraction of tissue RNA & Protein' 부분입니다. 

1. Tissue 에서 RNA 또는 Protein 을 추출하기 위해서는 조직을 파쇄하는 것이 더 효과적이라고 들었습니다. 저는 조직을 파쇄하는 방법으로 Syringe와 RIPA lysis buffer를 이용하는 방법, Bead와 PBS를 이용한 Homogenization 방법, 또는 PBS를 더한 후, Sonication 하는 방법이 있는 것으로 알고 있습니다. 실험실에서 실험방법을 재정립하는 과정에서 이 3가지 방법 중 또는 다른 방법 중 어떤 방법이 효과적일까요? 전문 선생님들께서 경제적인 측면도 고려해주셔서 의견주시면 감사하겠습니다..!

2. Tissue 파쇄 또는 균질화 후에 보관 방법은 어떻게 하시고 계신지요? (예. -20도 냉동고에서 일주일 보관, -80도 냉동고에서 1년 이상 보관)

3. Tissue 마다 RNA 또는 Protein 추출하는 방법이 다 다른가요? 아니면 동일한가요? 

4. Tissue에서 Protein 추출 후에는 단백질 정량을 하려합니다. Bradford assay를 통해 정량하려하는데 괜찮을지요? 어떤 글에는 BCA assay로 보통한다는 글이 있어 여쭤봅니다. 

5. 단백질 정량 후에는 ELISA, WB을 하려하는데, 실험 순서는 어떻게 진행하면 좋을지요? 

구체적으로 설명해주시거나 상세히 도움주실 선생님들.. 쪽지나 답변 꼭 부탁드립니다..! 


제 글 읽어주셔서 감사합니다. 

실험 초보 좀 도와주십시오.

##Tissue
 
##RNA
 
##Protein
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
아이에스에스  |  2021.03.23    

안녕하세요.

 

과학기자재 납품업체 아이에스에스입니다.

 

저희쪽에선 보통 Homogenization으로 많이 찾으십니다.

RNA추출이나 PROTEIN추출 시 KIT 많이 사용하시는데 

기회가 된다면 저희제품도 고려부탁드립니다.

http://www.lab-tron.co.kr/bbs/content.php?co_id=03

https://insungscience.com/GENEALL/view/2250970

https://insungscience.com/GENEALL/view/2253885

 

Info@issci.co.kr

감사합니다.

ㅅㄹㅇ  |  2021.03.28    

저는 tissue RNA뽑을때 pastle로 갈아요.

 

질소로 얼려서 pastle로 으깨면 RNA잘나오더라구요.

 

시약은  trizol사용 합니다.

알21cbnuEM  |  2021.04.01   

ㅅㄹㅇ 선생님, 답변 감사합니다. 

여유가 되면 선생님 방법도 사용해서 여러 방법들과 비교해보겠습니다 :)

초보자  |  11.15 17:11   

안녕하세요,

C57BL/6 mice Brain - Cortex로 qRT-PCR을 준비하고 있는 사람입니다.

혹시 성공하셨다면 프로토콜을 공유 받을 수 있을까요?

가능하다면,

tyeon98@naver.com으로 부탁드립니다!!!ㅠㅠ

감사합니다.

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