실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
nuclear extract 진행 후 western blot 혹은 NFkB p65 activation assay
레벨1 당나귀 (대학원생)
안녕하세요 석사과정을 진행중인 학생입니다.
nuclear protein extract를 진행하여 NF-kB p65 activation assay 와 western blot을 진행하고자 합니다.
저희 연구실에서는 active motif에 nuclear extract kit (cat#40010)을 사용하고 있는데 마지막 단계까지 진행 후에 LSB (Laemmli sample buffer) 를 넣고 boiling 을 진행한 후 상층액을 통해 NF-kB p65 activation assay 와 western blot을 진행하면 되는것인지 질문드립니다.
혹은 LSB (Laemmli sample buffer)를 넣지않고 protocol 마지막 단계에서 단백질 정량 후 western blot 혹은 NF-kB p65 activation assay를 바로 진행하면 되는것인가요?
추가로
만약 LSB (Laemmli sample buffer)를 넣지않고 진행하는 것이 맞다면 active motif에 nuclear extract kit (cat#40010)가 아닌 NE-PER Nuclear and cytoplasmic extraction reagents (cat#78835)도 LSB (Laemmli sample buffer)를 넣지않고 단백질정량 후 바로 western blot 혹은 NF-kB p65 activation assay 를 진행하면 되는것인가요?
답변 부탁드립니다..