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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
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질문 his tag protein purification
알원원이(대학생)  | 02.26 15:30

안녕하세요 학부 연구생으로 현재 protein purification 실험을 준비하고 있습니다. his-tag column에 target protein을 내리고 SDS-PAGE로 우리가 원하는 단백질만 정제가 되는 것을 확인했습니다. 이후에 target protein 2개와 단백질이 반응하여서 어떤물질이 나오는데 그것을 확인하기 위해서 GC로 확인을 합니다. 근데 단백질 정제를 하고난 단백질들은 Elution buffer에 존재합니다. Elution buffer에는 고농도의 imidazole이 들어있는데, 알아본 결과 다음 실험을 진행할때 imidazole이 제거되어야 한다고 들었습니다. 뿐만 아니라 tag제거를 안해도 되는지 여쭤보고 싶습니다. 그냥 Elution buffer에 바로 반응을 진행해도 되는지, 정제 후 과정이 어떻게 이루어지는지가 궁금합니다 ㅠㅠ 

#protein purification
 
#his-tag
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  02.26 16:23  

1. 그냥 Elution buffer에 바로 반응을 진행해도 되는지

: 정제 단백질로 어떤 실험을 하는지에 대한 설명이 없기 때문에 알수없습니다.

2. elution buffer는 buffer change를 하면 원하는 용매로 변경가능합니다.

3. tag 제거는 활성 문제이기 때문에 반응을 시켜본 후 활성에 문제가 있으면

제거해서 활성을 측정해 봐야 합니다.

구구가까  |  02.27 00:08   

Imidazole이 제거되야 하거나, 반응이 일어나는 buffer가 elution buffer와 다를경우, dialysis를 통하여 protein이 녹아있는 buffer를 바꿔줘야 합니다.

또한 his tail이 영향을 미치는 경우도 있기 때문에(영향을 끼치지 않는 경우도 있습니다.) his tail과 GOI 사이를 자를 수 있게 특정 recognition site를 넣어줍니다.(ex. SUMO site)

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