실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
protein purification후 elution sample aggregation
레벨1 정제는 재미없어 (일반인)
안녕하세요. 정제는 재미없어하는 연구원입니다.
Protein purification, His-tag system을 사용하는데
elution sample을 pbs로 buffer change, aggregation 발생합니다.
해당 protein의 pI값 7.5
pbs buffer change를 하지 않고, 농축시
nanodrop 측정 값 : 10mg/ml, a260/280 값이 1 정도 나옵니다.
(DNA contamination or lysis buffer 때문이라함)
purity 문제도 있고, 장기적으로 보관시 안정성 문제도 있어서
맞는 storage buffer를 찾는데 조언좀 부탁드립니다.
실험했던것
1. 50mM sodium carbonate pH10.8+250mM sodium chloride 조건에서 정제하여 250mM imidazole elution 후 pbs dialysis --> aggregation
2. 50mM sodium carbonate pH10.8+250mM sodium chloride 조건에서 정제하여 PBS + 250mM imidazole elution 후 pbs dialysis --> aggregation
위에 해당되는 실험들은 amicon tube를 사용해서 buffer change했을때도 동일하게 aggregation이 생겼습니다.
현재 PBS + 250mM imidazole elution 받은걸로 농축해서 쓰고있습니다.
많은 조언 부탁드립니다...ㅠ
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