[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
서린바이오사이언스
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
브릭이만난사람들
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
조회 869  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 protein purification후 elution sample aggregation
알정제는 재미없어(일반인)  | 02.26 15:30

안녕하세요. 정제는 재미없어하는 연구원입니다.

Protein purification, His-tag system을 사용하는데

elution sample을 pbs로 buffer change, aggregation 발생합니다.

해당 protein의 pI값 7.5

pbs buffer change를 하지 않고, 농축시

nanodrop 측정 값 : 10mg/ml, a260/280 값이 1 정도 나옵니다.

(DNA contamination or lysis buffer 때문이라함)

 

purity 문제도 있고, 장기적으로 보관시 안정성 문제도 있어서

맞는 storage buffer를 찾는데 조언좀 부탁드립니다.

 

실험했던것

1. 50mM sodium carbonate pH10.8+250mM sodium chloride 조건에서 정제하여 250mM imidazole elution 후 pbs dialysis --> aggregation

 

2. 50mM sodium carbonate pH10.8+250mM sodium chloride 조건에서 정제하여 PBS + 250mM imidazole elution 후 pbs dialysis --> aggregation

 

위에 해당되는 실험들은 amicon tube를 사용해서 buffer change했을때도 동일하게 aggregation이 생겼습니다.

 

현재 PBS + 250mM imidazole elution 받은걸로 농축해서 쓰고있습니다.

 

많은 조언 부탁드립니다...ㅠ

 

#purification
 
#aggregation
 
#storage buffer
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  02.26 16:20  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

발현 시 soluble 하게 발현되었나요?

soluble하게 발현되었다면 pI 문제로 인하여 pH 8.5 이상, pH 6.5 이하의

조건에서 stable 할 것 같습니다.

NaCl은 protein stability에 문제가 없으면 100mM 정도 첨가해도 될것

같습니다.

알정제는 재미없어  |  02.26 16:40  

insoluble protein으로 발현되서,,

위 버퍼에 +6M urea를 사용해서 lysis 했습니다.

refording 조건은 잡아서 target elution, purity 확인했고,

지금 storage buffer 조건을 찾고있는데,

남아있는 urea때문에 aggregation 문제도 생길수 있을까요?

대왕개구리SPEED  |  02.26 17:09  

refolding 조건을 잡았으면 시료에 urea가 남아있나요?

아마도 refolding 조건에 문제가 있는 듯 합니다.

refolding은 변성 시킨 urea를 제거하면서 folding되게하는 과정인데

조건이 최적화되지 않으면 urea가 제거됨과 동시에 침전이 발생합니다. 

정제는 재미없어  |  03.02 09:01   

Urea dialysis시에는 aggregation 발생하지 않았습니다.

 

정제 후에 Elution, 농축까지는 큰 문제가 없으나

 

보관중에 안정성 문제가 있습니다.

답변하기
할인행사 광고 검색광고
인성크로마텍 인성크로마텍
Phenotype Microarray™ - High-throughput 세포 대사 & 민감도 스크리닝 분석.. (5.1까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
두둥! 최대 원쁠원 행사부터 20% 행사까지! 없는거 빼고 다 있는 필코리아테크놀로지 할인행사! (4.20까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
우체통 열어주세요 필코리아테크놀로지의 뉴스레터가 들어가니까요!! (4.20까지)
바이오닉스 바이오닉스
[TECAN공식대리점] 봄맞이 사은이벤트 (5.1까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[IMPLEN공식대리점] UV/Vis Spectrophotometer 구매 시 선착순 멀티 파이펫 FREE!.. (4.31까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN한국대리점 20주년] Microplate reader 초특가 이벤트!! 20년 서비스 노하우 (6.31까지)
브래디 브래디
초저온라벨 등 실험실용 라벨링 솔루션 (4.27까지)
프리미엄 등록안내
최근등록   더보기 >
형광단백질 농도 계산   04.19
Annexin 관련 질문...control이 너무 많이 죽습니다   04.18
유산균 배양에 있어 생균수 측정(CFU/mL) 실험 질문드립니다.   04.18
복합배지조성의 microelements 정보 질문 드립니다.   04.18
Raw cell ROS assay 해보신분,,,   04.18
항산화,활성산소 관련 실험 설계를 해봤는데 한 번 봐주세요!!   04.18
이 논문에 나와있는 리포좀 제조 방법에 대해서 어떻게 생각하세요?   04.18
나노파티클 동결건조 후 입자특성   04.18
nickel chromate chromatography 질문드립니다. -재업   04.18
des-Arg   04.18
최근답변자 우수답변자
대왕개구리SPEED

올챙이kaldose

개구리bio

알덩지

대왕개구리강시

알피건해여

알okokay

올챙이MJCB

꽃개구리Applied_Mi..

꽃개구리Jake

개구리처음처럼

개구리곰돌2

대왕개구리엘피스

대왕개구리강시

개구리빛초롱

개구리유전학도^^v

실험관련연재
박은총 연재중후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
Mr.S 연재중의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재중실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
이제욱 연재중생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아 광고