ultra 돌린 lenti를 치면 아마 hES/iPSC 많이 죽을거에요. 

PSC가 많이 민감해서 free nucleotide 가 제거 되지 않은 lenti를 치면 상태가 많이 좋지 않습니다. 

https://www.takarabio.com/documents/User%20Manual/Lenti/Lenti-X%20Lentiviral%20Expression%20Systems%20User%20Manual%20%28PT5135-1%29_062619.pdf

lentiX 사용하면 ultracentrifuge보다는 조금 괜찮은데 가장 좋은 방법은 HPLC로 정제하는 방법이 가장 최상의 방법입니다. 

조금 다른 이야기지만 분화 목적이라면 다르지만 혹시 PSC에 lenti를 사용하는게 overexpression이나 뭐 이런 용도로 간단하기는 하지만 좋은 논문으로 가려면 아마도 많은 리뷰어가 CRISPR-Cas9과 같은 gene editing으로 mutation을 교정하던지 safe haboring locus에 target gene을 넣어서 1 copy 혹은 2 copy만 들어간 상태를 보기를 원할거에요.

답변주신 bio님 감사합니다. 

제가 문의한 답변에 반은 bio 님이 해주신 것 같네요^^

스에세상에나 ~!!! 보내주신 LentiX 이런 제품이 있다니요~!!!! 감사해요!

1.질문  

답변을 듣고 찾아봐야 되는데;; 혹시 PSC가 민감해서 free nucleotide가 제거되지 않은 상태를 치면 안좋다아~ 이것이 무슨 의미인지 알 수 있을까요? 

Free nucleotide는 세포 안에 있을 거 같은데 (? 그냥 제 생각이예유ㅜㅜ )

우선 virus harvest하면서 1차로 낮은 속도로 돌려서 제거하잖아요? ;; 

혹시 이 free nucleotide가 DMEM/10%FBS배지에 있어서  좋지 않다 이 의미일까요????? 

DMEM/10% FBS 이 배지가 stem cell의 분화를 유도할 수 있어서 안 치느 것이 아닌가요? stem cell 처음 키우고 4개월 이상이 되었지만;; 제가 완벽하게 stem cell키우는것을 잘 안다고 말하기가 어려워서요. 

2. bio님이 말씀해주신 내용으로 잘 검색해서 보니 

제가 받아서 치게되는 gene이 보니깐  plenti puro~~ blabla plasmid가 말씀해주신 CRISPR-Cas9과 같은 gene editing 방식으로 cloning 된 것이었어요!! 다시 한 번 더 감사합니다. 

3. 따로 질문을 올려야 겠지만; 

lenti virus로 virus인지라 오염의 문제 등으로 HPLC 기기 등을 이용하기 어려울 것으로 생각이 되어 ultracentrifuge로 진행하게 될 것같으데, 

virus를 pellet으로 얻으면 제가 본 protocol에는 PBS로 resuspension하라고 되어있는데, PSC 키우는 배양 배지 mTeSR로 하면 어떨런지 궁금합니다!!!