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1.5% 정도에서 확인하면 되고 RNA양은 1ug 정도를 사용하면 됩니다.
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레벨2
연구원지망생
(대학원생)
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21.02.23 01:19
저희 lab실이 이런 과정을 안 거쳐서 처음인데요ㅠㅠ그럼 rna 1ug 넣고 나서 rnase free water 를 얼마정도 넣으면 되나요? 그리고 현재 6x loading dye가 pre mix 형태의 pcrtube로 나오는 걸 사용하고 있습니다~ loading 시 sample volume을 얼마정도 하면 되나요?
그리고 6x loading dye+ rnase free water + rna 1ug넣고 standard pcr 하듯이 녹여서 loading하면 되나요? 아니면 다른 과정이 필요한가요???
급합니다ㅠㅠ 빠른 답변 부탁드립니다.
질문해주신 내용을 완전히 이해하기가 좀 어려운데...
우선 교수님께서 왜 RNA를 gel을 내려보라고 하신 건지는 확인해보셨을까요?
PCR product처럼 DNA의 size를 확인해야하는 것도 아닌데 왜 RNA를 gel에 내려보라고 하셨는지를 아시는 것이 중요할 것 같습니다.
gel을 내리고 gel 사진에서 무었을 확인하실 수 있는지를 아셔야 할테니까요.(HPRT 값이 튀는 원인이 될 수 있겠죠)
만약 RNA를 DNA GEL에 SAMPLE을 걸게되면 DNA만들듯이 RNA를 만들게 되면 RNA sample을 2ul 넣고 rnase free water 17ul 넣고 만들면 되나요???
이 문장이 정말 난해한데 sample을 loading하는 방법을 말씀하시는걸까요?
loading 자체는 DNA에서 loading 하시는 것과 똑같이하시면 됩니다.
RNA-> revers transcription을 통해 cDNA를 합성
cDNA -> real time PCR 증폭
cell에서 purification한 RNA를 cDNA로 합성하여 real time PCR 수행하는거 같은데...
DNA 만들듯이 RNA를 만드는게 아니라,
RNA 정량하여 1ug에 해당하는 volume을 gel로 확인하는 과정입니다.
dye가 premix형태로 나오는 것이 아니라 아마 PCR pre-mix (taq polymerase)겠지요..
dye + taq polymerase +buffer 등등 들어있어서 PCR후에 바로 gel을 걸어서 확인할 수 있는 mixture 사용하시는 것 같은데..
아마 RNA loading dye가 있지 않을까 싶습니다.