실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
signal sequence 뒤에 his tag 붙이기
레벨1 yangkim (과기인)
scfv를 생산하기 위하여 artificial한 signal sequence를 달고 바로 뒤에 6Xhis를 달았습니다.
그 후 nickel column으로 정제를 하였지만 수율이 3%정도로 나오고 있습니다. ELISA를 하면 detection은 되지만 SDS 상으로는 예상되는 size를 보기 어렵습니다.
하여 his tag이 제대로 발현되지 않다고 생각하였는데, sequence에서 문제를 찾기가 어렵습니다. ㅠㅠ
혹시 signal sequence 바로 뒤에 his tag을 붙일 경우 발현에 문제를 줄 수 있나요? Cleavage site 바로 뒤에 HHHHHH를 붙였습니다.
아니면 이 scfv뒤에 다른 단백질도 달려있는데 구조상 N-terminal에 붙이기 어려운 것 일까요?
sequence를 다시 디자인 해야 한다면, tag위치를 바꿀지 아니면 his tag 앞에 다른 서열을 몇 머 추가할 지 고민입니다.
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