[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
국립해양생물자원관
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
실험실 새내기를 위한 안전교육
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 650  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 western 결과 band가 아래에 뜨는 이유?
올챙이호안미로(대학생)  | 02.19 15:03
첨부파일 파일첨부: Screenshot_20210219-145638~2.png (1.36 MB)
이미지 첨부파일
target protein은 약 130kDa 정도의 크기를 가진 p-jak 으로 웨스턴을 진행하였습니다.

7.5%gel에 전기영동후 1시간 트랜스퍼하여 항체를 실온 2시간 20분정도를 붙였고 희석은 5% bsa(in 0.05% pbst)하여 처리하였습니다. blocking은 5%bsa 그리고 워싱은 pbst로 10분마다 한 번씩 3번 진행하였습니다.

그 결과 사진처럼 band가 약 63kDa 근처에서 가장 진하게 나와 이유를 찾아보다 글을 올립니다..
130 근처에서도 희미하게 밴드가 보이기는하는데.. 그외 마커부분(75kda)에도 밴드가 조금 보이고 다른 크기의 밴드들도 잡히는 이유가 무엇인지 도통 감이 안잡힙니다.. (단순히 non specific한 항체반응인지...)

첫번째 lane도 다른 lane보다 진하게 나올 이유가 없는데.. (정량 및 로딩시 문제일거라 생각)

목적단백질이phosphoform이기 때문에 밴드가 잘 보이지 않았거나 모두 non specific한 band가 아닐까란 생각도 해보았고 목적 단백질이 cleavaged 되어 저렇게 밴드가 아래에 나타날 수도 있는게 아닐까 생각해보았는데 그럴 수 있는지 전혀 감이 잡히질 않습니다..

웨스턴이 처음해보는 실험이고 물어볼 사람도 없어 다른분들의 의견을 들어보고싶습니다..
#jak1
 
#phosphoform
 
#p-jak1
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리아이고야  |  02.19 18:18  

다른건 모르겠지만..포스포폼 보시려면 PBST 쓰시면 안되고 TBST 쓰셔야할거같아요!

올챙이호안미로  |  02.19 23:22  
답변 감사합니다..! 제가 잘못 기재했네요 pbst가 아니라 tbst로 사용하였습니다!
개구리닥눈삼  |  02.19 23:59  

사용하신 항체 정보가 더 있으면 좋겠네요.

어느 부위를 타겟으로 하는 항체인지 모르겠으나 예상 사이즈가 좀 크네요.

올챙이호안미로  |  02.20 01:35  
답변 감사드립니다..
실험에 사용한 셀은 raw264.7 이고 1ug/ml의 lps를 30분 처리하여 찍은 것입니다.
사용한 항체는 다음과 같습니다.

1st: p-jak1 (pa5-104554 /invitrogen)
2nd: goat-anti rabbit igG (65-6120 /invitrogen)
대왕개구리SPEED  |  02.20 11:51  

Raw cell에서 LPS 처리 후 Jak1 phosphorylation을 측정한 이유가 있나요?

LPS activation pathway와 Jak1 pathway는 다른 경로 아닌가요?

올챙이호안미로  |  02.20 19:28  
늘 답변 감사합니다.
lps처리하여 activation된 raw cell에서 jak1과 jak2의 phosphorylation이 일어나 염증반응이 유발되는 내용의 논문들을 보고 이를 참고하여 실험을 진행하였습니다.
답변하기
할인행사 광고 검색광고
아이클루바이오 아이클루바이오
작지만 강력한 SPR biosensor, iMSPR-mini 2021년형 모델 출시 기념 프로모션! 10년.. (3.31까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
UV/Vis Spectrophotometer 구매 시 선착순 멀티 파이펫 FREE!! 놓치지 마세요~ (4.31까지)
비앤코리아 비앤코리아
RNA/DNA 정량 장비 / 라이브 세포 이미징 장비 파격행사! 선착순으로 진행됩니다 서두르세요 (3.25까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN] Microplate reader 초특가 이벤트!! 할인이 쏟아진다~ (6.31까지)
엠피바이오메디칼스코리아 엠피바이오메디칼스코리아
토양/분변/마이크로바이옴 DNA 추출키트 파격 1+1 이벤트 ! (6.30까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
UV/Vis, Fluorescence & Cuvette 모두 가능한 기기를 이 가격에?! (3.2까지)
브래디 브래디
초저온라벨 등 실험실용 라벨링 솔루션 (4.27까지)
프리미엄 등록안내
최근등록   더보기 >
Western blot cell harvest할때 트립신   03.01
생명 과학 질문 등록   03.01
논문 유의성 의미   03.01
western blot SDS page loading buffer (dye) 사용시 어떻게...   03.01
고등학생 화학 실험   03.01
stock 된 virus extraction 하는 원리   03.01
CTAB buffer의 PH   02.28
배지에 항진균제를 넣어도 될까요?   02.28
HPLC 용매에 기포가 계속 차요..   02.28
실험 때마다 결과가 반대로 나오면 무엇이 잘못인 걸까요?   02.28
최근답변자 우수답변자
개구리bio

알효옹

대왕개구리SPEED

뒷다리hihithere

개구리닥눈삼

알1^~^1

알석석석사

알대학원생11

대왕개구리안재진

꽃개구리Baltimore

꽃개구리Kozmoj

개구리bio

개구리propadrum

개구리애니

개구리ryan

개구리현직백수

실험관련연재
박은총 연재중후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
Mr.S 연재중의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재중실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
이제욱 연재중생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크 광고