실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
콜라겐 추출에 관하여...(엘피스, 안재진, 강시 선생님 살려주세요)
레벨1 okop311529 (대학생)
안녕하세요.
글을 자주 올리게 되네요. 선배님들의 조언이 실험을 하는데 많은 도움이 되어 자주 찾아뵙게 되는 것 같습니다.
오늘은 세가지 질문을 드리고 싶습니다.
1. 저는 펩신 가용화 콜라겐 추출 실험을 현재하고 있습니다. 0.5M acetic acid에 pepsin을 함께하여 교반 후 원심분리하여 얻은 상층액을 염침전시켜 투석을 하고 있습니다. 근데 아세트산을 투석외액으로 사용하기 이전에 Na2HPO4를 투석외액으로 먼저 사용하던데, 그 이유가 펩신을 불활성화 시키기 위함이라고 알게 되었습니다. 제가 알고 있는 것이 맞는지, 맞다면 간단하게 원리를 설명해주시면 감사할것 같습니다.
2. 1번에서 투석 및 동결건조까지하여 얻은 콜라겐을 물에 녹였는데 잘 녹지 않았습니다. 제가 샘플을 녹인 용액은 아세트산을 사용하였는데 아세트산에 녹여서 전기영동을 해야하는지, 아니면 에탄올이나 DMSO에 녹여서 전기영동에 사용하여야 하는지 궁금합니다.
3. sds page용 단백질 샘플을 만들 때 샘플버퍼를 넣고 폴리펩타이드를 선형으로 만들어주기 위해 95도에서 약 5분간 반응시키는걸로 알고 있습니다. 콜라겐은 열변성에 특히 취약해서 실험을 저온조건에서 진행해야하는데 그러면 95도 가열도 하면 안되는지 궁금합니다.
콜라겐 단백질 추출 및 전기영동을 해보신 선배님들의 조언 기다리고 있겠습니다. 감사합니다.