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Transfection이 잘 안돼요 ㅜㅜ
레벨1 rudsk (대학원생)
안녕하세요. 석사과정생입니다.. 저는 SCN10A (NaV 1.8)을 ND7/23, HEK cell에 transfection 시키는 조건을 잡는 중입니다.
Reagent는 Lipofectamin 3000, Turbofect, Fugene 6, translt-x2 를 사용해봤으며 DNA와의 비율은 여러 조건으로 해보았습니다.
관련 주제의 논문에서는 Lipofectamin이나 turbofect의 standard protocol로 진행했다고 하는데 저는 왜 안되는걸까요..?
최근 transfection 전 FBS free media로 6시간 incubation 한 뒤 reagent와 1:0.1의 비율로 48h 정도 후 확인하니 10-20% 정도 보였습니다. 하지만 막에 발현된 것 처럼 보이는 건 거의 없고 cytosol내에 점처럼 뭉쳐있고 current 측정 시 NaV1.8이 아닌 것 같습니다.
다른분들은 transfection 조건을 어떻게 잡는지 궁금합니다. 도와주세요ㅜㅜ
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