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질문 protein interaction관련 고수님들의 생각을 듣고 싶습니다.
개구리ryan  | 2009.01.02 15:14
안녕하세요, 먼저 모두들 새해복 많이 받으세요.

방금 질문들에 달린 답변들을 확인해 보다가(제가 그것들로 인해 많이 배우거든요^^)
얼마전 whatever님의 답변을 보게 되었습니다.

IP시 DSP로 고정을 시킨후 실험을 하신다고요.. 저는 완전 처음 접하는 내용이었습니다.

저는 protein conjugation을 시키는데 DSP와 비슷한 DTSSP를 사용하고 있었거든요..
하이튼, 바로 제가 가지고 있던 bioconjugation techniques란 책을 피고 확인해 보았는데, DSP는 protein interaction의 개발에 있어서 중요하게 쓰인다고 되어있더군요.
여기서 드는 생각은 whatever님이 하신 말씀처럼, lysis전에 DSP로 고정을 해버리면,
cell 안에서의 interaction이 fixation되기 때문에,, IP를 더 효과적으로 수행할 수 있을 것이란 생각인데요,
더 나아가 DSP는 DTT or mercaptoethanol에 의해 reduction되니깐, 이것들이 없는 lysis buffer를 사용하면 interaction의 분리없이 lysate를 얻을 수 있을 것입니다/

이말은 RIPA같이 쎈 buffer로 lysis를 하여도 괜찮다는 말이 되고요..
그렇게 되면 핵안에서의 결합유무도 확실히 확인이 가능할 것 같고요..
완전 유용한 방법인거 같은데요..

이 방법을 써서 IP를 해도 문제가 없겠는지요? 왜냐면 많은 논문을 읽어 보았지만 이방법을 통해 IP를 한다는 말은 읽어본적이 없어서요..
고수님들의 생각을 듣고 싶습니다.
#DSP
 
# protein interaction
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
whatever  |  2009.01.03    
제가 논문에도 없는 방법을 뭐하러 권하겠습니까?

Distinct beta-Arrestin- and G Protein-dependent Pathways
for Parathyroid Hormone Receptor-stimulated
ERK1/2 Activation, JBC, 2006

보다 자세한게 있었는데 지금 어디있는지는 모르겠고... Pubmed에 DSP immunoprecipitiation 만 쳐도 꽤 나옵니다.

참고루 DTSSP는 cell surface molecule들을 fixation 하기 위해서 쓰는것으로 압니다.
궁금이  |  2009.01.03    
whatever님
그럼 cross-linking할때 amine이 있으면 안되는 이유가 뭔가요?
whatever  |  2009.01.03    
amine 이 있으면 안되는 이유는 바로 amine과 반응하기 때문입니다. 따라서 amino acids 중에서 lysine과 반응합니다. 그러니까 시약이나 버퍼 조성에 amine 계열이 있으면 안되겠죠?
개구리ryan  |  2009.01.03   
whatever 님, 답변 감사합니다.
제가 글을 이상하게 썼나보군요.. 죄송합니다..

whatever 님의 말씀을 반박한게 아니고, 저는 처음들어보는 좋은 방법이라,,
제 생각을 다시 물어 본것입니다.

좋은 정보 감사합니다.^^

추가로 저는 DTSSP cell에 protein을 conjugation시킬 때 사용합니다.
생각을 다시 해 보면 말씀하신 fixation의 의미도 되겠네요^^
fick  |  2009.03.04    
Whatever 님 대학원생은 아니시길바랍니다. 아니 아니시겠죠.
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