실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Purification/Isolation
DNA Cloning 질문 드립니다.
레벨1 S1000rr (대학생)
안녕하세요. 선배님들...! 생명과학과 학부생입니다.
다름이 아니라 제가 개인 project 실험을 하고 있는데,
지금 전체적인 틀이 잡히지 않습니다...
1. mini-prep
2. Cloning 방식.. cDNA를 만들고, cDNA에서 원하는 것을~
3. Drosophilia Ovary 해부, cDNA를 만들고 VASA pET21a
4. Protein Purification 까지 끝내기
p.s. +Gibson assembly 를 사용해서 VASA 유전자를 pET21a vector 에 복제한다. Cloning 에 사용할 pET21a 에서 sequence 정보를 찾을 수 있다.
기본 전략은 T7 tag와 His tag 사이의 이 vector 에 VASA-항원 sequence 를 넣는 것이다. 성공하면 T7-VASA-His 융합 단백질을 유도할 수 있으며, his-tag 정제 키트로 정제할 것이다.
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여기까지인데 지금 자연스럽게 연결(?) 틀이 안잡혀서 이해가 안됩니다.
그리고 주문해서 현재 가지고 있는 것은
Primer 로써, Oligo 합성 25, Oligo 합성 50
그리고 ExiProgen™His-tagged Protein Purification Kit (16reactions),
IPTG (5g) 을 주문해서 받았습니다.
창피하지만, 제가 무엇을 정확하게 해야할지 흐름이나 맥락조차 지금 이해가 잘 되고 있지 않아서 자연스럽게 이해를 하고 싶습니다.
상세하게 설명해주시면 정말 큰 도움 될 것 같습니다....
감사합니다. (_ _)
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