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전기영동 사진은 원하는 부분만 자르지 말고 전체를 확인하는 것이 좋습니다.
아래 부분이 안보여서 확실하지 않지만 시료 별 primer양이 일정하지
않습니다
PC의 아래 부분이 남은 primer로 보이는데 sample은 증폭이 안되어서
primer가 대부분 남아있어야 하는데 안보이네요.
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레벨1
Red Bread
(대학생)
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21.01.28 13:42
Sample에서 PC처럼 뜨는게 아니고 NC처럼 뜨는게 맞는 실험이에요
PC의 DNA가 있는지 확인한게 아니라 없는지 확인한거라서요
그러니 Primer가 전부 반응을 했지만 PC의 DNA가 없으니 띠가 안생기고 남는 Primer도 없는게 맞겠죠
근데 궁금한건 PC의 결과값이 연하게 나오는 이유가 궁금한거죠
밑에를 자른 이유는 5개 모두 저기 이상으로 내려간게 없어서 잘랐구요
혹시 밑에까지 있는게 답변에 도움이 될까 싶어 같이 올려드려요
sample이 NC 처럼 나오는 실험이라는 것은 알고 있습니다.
primer를 확인해야 하기 때문에 아래까지 있는게 좋습니다.
우선 PC에서 2 band가 나오는게 정상인가요?
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레벨1
Red Bread
(대학생)
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21.01.28 14:43
PC에서 Band는 원래 200~300사이에 하나만 나오는게 정상이에요
혹시나 해서 물어본 건데 역시나 제일 아래 band는 증폭 후 남아있는 primer
입니다.
PC의 경우 band가 연한 것은 반응이 잘 안되어 primer가 많이 남아있습니다.
band가 증폭되어 양이 많아지면 primer band는 사라집니다.
그러나 NC, S1, S2는 반응이 안되었는데도 남아있는 primer 양이 일정하지
않습니다.
PCR mixture 혼합에도 문제가 있습니다.
정상적이라면 제일 아래 primer bnad는 NC, S1, S2는 동일한 양이 남아
있어야 하고 PC는 primer band가 사라져야 합니다.
30cycs 이상 증폭했으면 PC의 primer가 대부분 사라지는데 PCR 조건이
최적조건은 아닐거라 생각됩니다.
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레벨1
Red Bread
(대학생)
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21.01.28 15:48
그러면 PCR 조건을 한번 확인해 봐야겠네요
감사합니다