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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
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질문 RNA 260/230 순도가 너무 안좋아요 ㅠ
올챙이실험은(대학생)  | 01.27 18:15
Rna 추출 방법은 Chang 1993 방법을 기본으로 합니다
RNA 뽑을때 시료가 오염된거면
아무리 뽑아도 잘 안뽑힐 수가 있나요!???
항상 농도는 1000-2000ng/ul 나왔었고
순도도 실수 안하면 나노드랍 에서 2.0-2.2 사이로 잘 나왔구요...

1. 저희 실험실에서 항상 잘 뽑았는데 어느순간 갑자기 안뽑혀요 ㅠㅠ 농도도 300-500ng으로 나오고 순도는 260/280은 좋은데 260/230이 1.5-1.6 사이로 나와요
달라진건 장소랑, 디프리져 냉동고를 옮기면서 10-20분 정도 전원 꺼진거에요 (안에 시료가 있었구요)
혹시 그때 녹아서 문제가됐나 싶기도 하고요......


아니면

2. C:l 나 에탄올이 오염돼면 그럴 가능성도 있나요? 따로 덜어서 사용하지 않았거든요.. 쓰면서 오염됐을 가능성이 있는지 ㅠ
그외 시약은 전부 다시 만들었어요

주로 식물 잎이나 가지를 마쇄해서 디프리져에 보관해놓고 사용합니다.

3. 근데 또 이해안가는건 지금 한 시료를 30개 정도다시 뽑았는데 28번은 실패하고 2번은 또 제대로 나왔거든요.... 그런거 보면 시료문제는 아닌거 같긷한데....

추측되는건
1. 시료 오염 가능성
2. C:I나 에탄올 오염 가능성
3. 그외.... 시료를 너무 적거나 많게써서...?
(2ml 튜브에 200ug정도 넣습니다.. 근데 500ug 넣어도 실패하네요 ㅠㅠ)
뭐가 클까요 ㅠㅠ
4. 마지막에 에탄올 넣을때 볼텓싱안하고 인벌팅 만 해서? Lici넣고 볼텍싱안하고 인벌팅만해서? (원래 프로토콜은 인벌팅만 하는건데 잘 나왔어요)

5. 순도만 안좋으면 상층액 잘못땄다고 생각하면 되겠는데 농도는 예전처럼 그대로 높게나와어 할텐데 왜 300-500ng밖에 안나오는지 궁금하네요 ㅠㅠㅠ 같은 시료입니다 ㅠ
#Rna
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