실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
클로닝 시 construct 짤 때 프로모터 방향 질문입니다.
레벨3 soonlok (대학원생)
클로닝 디자인을 하는데 있어서 많이 부족해서 여기에 질문 올려봅니다
A와 B라는 유전자를 이어붙이려고 하고 있는데요
계획을 한 것이
XmaI-A-NotI, NotI-B-BamHI 이렇게 구성을 했고 따로따로 pRS314 벡터에 넣어서 수를 늘린 뒤 제한효소를 처리 후 이어주려고 하고 있습니다.
최종으로 XmaI-A-NotI-B-BamHI이 된 것을 pRS314 벡터에 넣으려고 했는데요
막히는 부분이 pRS314 벡터 맵을 보면 T7 프로모터 로 시작해서
(T7) NotI-BamHI-XmaI (T3) 이렇게 제한효소 사이트가 있어서요
디자인한대로 진행을하면 A는 제대로 읽혀도 B가 반대로 읽히는 것이 아닌가 하는 의문이 들어서
다른 벡터들을 찾아보니 pRS425 벡터에서
(T7) XmaI-BamHI-NotI (T3) 로 되어있길래 이걸 맨처음 B를 넣어줄 공벡터로 사용 해도 되는지 알고싶습니다.
선배들에게 배운바에 따르면 314와 425 벡터는 MCS 방향 자체가 반대라고 해서 헷갈리네요 ㅜㅜ
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