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질문 PCR 후에 염기서열 변화
올챙이chaeyeonim(대학원생)  | 01.27 16:09

안녕하세요,

 

저번에 primer질문했을때, 많은 분들이 봐주시고 대답해주셔서 감사합니다.

 

PCR에 대해서 한번 더 질문을 드리고자 합니다.

 

제가 현재 mutant PCR실험 중인데, 여태 했던 것들 중에 이런 경우가 없어서 어떻게 검색해야할지도 사실 잘 모르겠어서 이렇게 조언을 얻고자 합니다.

 

제가 mutant하지 않은 부분에서 염기가 바뀐것을 확인하였습니다.

딱 2부분이 동일하게 'C'->'A'로 바뀌었습니다..

 

증폭이 굉장히 잘되기때문에, 따로 DMSO를 이용하거나 bandDoctor를 사용하지 않고, 일반적인 PCR mixture로 하였는데 이런 현상이 있습니다.

 

간혹 이런경우가 발생할 수도 있나요?

#PCR
 
#염기서열 변화
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  01.27 16:13  

'C'->'A' 두 부분이 5'에서 몇번쨰 염기인가요?

또한 template DNA의 염기서열 분석은 정확히 확인했나요?

올챙이chaeyeonim  |  01.27 16:17  

각 154, 714번째입니다.

 

template는 sequencing을 한번 맡겨서 서열을 확인 후, mutant PCR을 진행하였습니다.

대왕개구리SPEED  |  01.27 16:25  

다른 mutant를 염기서열 분석 해 보거나 taq을 바꿔서 한번 해보세요.

요즘 증폭 효소 성능이 좋아서 증폭 잘되는 것은 당연하며 정확도가

중요한 실험은 cycs을 줄여서 실험하는 것이 증폭 효율보다 더 중요합니다.

clonign이나 mutation 실험 같이 증폭 정확도가 요구되는 실험은 Pfu 계열

효소를 사용하지 않으면 cycs을 줄여서 실험하면 별 문제 없이 진행 할 수 

있습니다.

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