안녕하세요 석사 재학중인 초보입니다.
IgG purification을 하게되었는데, 저희가 쓰는 resin은 rProtein A resin agarose resin을 사용합니다. 이 agarose bead ligand에 IgG Fc region이 binding하여 affinity chromatography로 정제한다는것은 이해를 했습니다.
그런데 Elution buffer가 0.1M Acetic acid를 사용하는데, 어떠한 작용으로 IgG를 Elution하는건가요??
이해를 하면서 배우는걸 중요하게 여겨, 이런 작은 질문 드려봅니다.. 감사합니다!
IgG + Protein A간의 affinity 결합이 떨어지는 조건이 몇개 있는데
그 중 하나가 산성 조건을 이요하는 겁니다.
산성에서 IgG + Protein A간의 affinity 결합이 떨어집니다.
존경하는 선생님, 말씀 감사합니다.
몇가지 더 궁금한 부분이있어.. 더 답글을 남기겠습니다.
그렇다면 다른 산들을 써도 되는건가요??
그리고 산성조건으로 Elution한다면.. IgG가 denaturation되는 부분이 없는건가요?
특정 산을 사용하는 것은 아니고 산성 조건이 필요 조건입니다.
pH는 2.5~3.2, 농도는 평균 100mM을 사용합니다.
HCl을 사용하기도 하고 Citric acid를 사용하기도 합니다.
IgG는 문제 없습니다.
참고로 다른 조건은 high pH, 이온강도, 변성조건, 특정 유기용매 등을
사용하기도 합니다.
부연설명 감사드립니다.
마지막으로 IgG는 왜 denaturation이 안되는거죠??
기본적으로 protein이라면 acid에 민감하지 않나요??
안재진
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