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HPLC trouble shooting 도와주세요..
레벨5 Arkadis (과기인)
HPLC 초보로서는 도저히 알 수 없어서 질문 드립니다.
이번에 HPLC를 이용한 정량 실험을 진행중입니다. day dependent한 방출 실험인데요..
calibration을 5점 잡고 0 point를 지나가도록 해서 calibration curve를 만들었습니다.
여기서 dot이 curve위로 정확하게 올라가진 않았지만 어느정도 오차범위엔 들어오기에 그럴 수 있다고 생각했습니다.
그런데 QC용으로 3번째 점을 다시 injection 했는데 값이 소폭 흔들렸습니다.
그리고 sample을 찍었는데 maximum이 50uM 로 실험을 진행했기에 그 이하 값이 나와야 하는데 sample의 peak가 500uM 근처까지 튀었습니다..
STD의 희석도 되짚어 봤는데 계산한 값대로 희석했고, 희석 계산도 검증해봤는데 문제가 없었기 때문에 더더욱 의문입니다.
sample의 경우 filtering이 불가능하다보니 원래부터 불안한 감이 있었는데 이정도까지 튀게 되니 전혀 사용이 불가능하다고 판단이 되었습니다.
이러한 경우 어디서부터 문제를 잡아야 할까요? STD? sample? 어디부터 손을 대야 할지 모르겠어서 질문드립니다..
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