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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
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질문 단백질 정제 후 dimer band가 나왔는데 어떻게 해야되나요?
올챙이지니25(대학생)  | 01.24 23:40

단백질 정제 후에 단백질 크기 band랑 dimer band가 같이 나왔는데 elution solution은 모아놓은 상태입니다. 여기서 어떻게 해야되나요?

#protein
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  01.25 09:42  

타겟 단백질이 dimer 폼으로 있어야 하는 단백질인가요? 아닌가요?

그리고 tagging을 달아서 정제를 하신건가요? 그리고 그 tagging이 사이즈 때문에 dimer라고 생각하시는건 아닌가요?

보통 정제가 끝나면 활성을 확인해봅니다...

올챙이지니25  |  01.25 09:43  

dimer가 없어야 하는 단백질입니다..... 

대왕개구리강시  |  01.25 09:46  

DTT를 처리해서 처리하지 않은 것과 같이 SDS-PAGE를 해 보세요.

DTT 처리하지 않았을때는 dimer 크기인데 DTT 처리했더니 monomer 크기로 나왔다면 -S-S- bond 로 결합된 dimer form  단백질입니다.

재조합 다ㅣㄴ백질이 아니라 원래 세포에서 정제했다면 dimer form이 active form으로 생각됩니다.

대왕개구리SPEED  |  01.25 09:47  

dimer라는 것은 어떻게 확인했나요?

완전히 정제를 해서 분석하지 않으면 dimer인지 알수 없을건데..

대왕개구리안재진  |  01.25 10:08  

정제는 native form으로 하셨고, PAGE 분석으로 샘플은 boiling해서 진행하셨는데 dimer 폼으로 나온건가요?

그렇다면 western 분석으로도 2개 단백질이 위 아래로 보이는지도 확인해보셨나요?

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