PCR의 결과물로써 band 가 예상한 만큼 진하게 나오지 않았을 때, template 을 희석하여 PCR을 다시 수행하는 이유는 template으로 사용한 물질에 PCR inhibitor (ex. EDTA, high salt.. etc)가 포함되어 PCR이 제대로 수행되지 않았을 것으로 예상하여 PCR 반응 tube 내 PCR inhibitor의 농도를 줄여주기 위함입니다.

template을 희석하였음에도 불구하고, PCR이 제대로 수행되지 않았을 경우에는, 위에서 언급한 문제에 의해 PCR이 제대로 수행되지 않는 것이 아니므로, Primer가 template에 제대로 binding 하는 지, 또는 PCR 수행 조건 등을 따져보아 다른 원인을 찾아 보는 것이 좋겠습니다.

PCR산물로 재반응을 할대 gel을 오려 prep을 하시나요? 아니면 저네 PCR product를 가지고 재반응을 하시나요?

전 PCR 산물로 재반응을 할때 내가 원하는 밴드만 오려서 prep을 진행합니다.

PCR이 안되면 분명 이유가 있습니다. template가 너무 많다던지 온도가 맞지 않는다던지 아니면 Primer가 분해 되었다든지, 그 이유를 천천히 찾아 보셔야 의미있는 오류를 찾을수 있습니다.

그리고 가장 중요한건 자신감입니다. 실험이 안되면 이유를 찾으면 됩니다. 모든 절차에 메뉴얼대로 항상 같은방법으로 정확히 한다면 이유도 금방 나오지만, 왔다갔다하는 방법으로 진행한다면 이유를 찾기도 어렵습니다. 똥손이라 생각하지 마시고, 메뉴얼부터 천천히 읽어 보시고 본인 시험과 어디가 다른지부터 확인해보세요

희석하는 이유에 대해서는 위에 분이 설명해주셨습니다.

1. pcr product를 만들때 DNA를 추출해서 쓰시나요?

2. pcr product가 25람다라면

pcr 기기에서 volume 설정을 25람다 이상으로 해주셨나요??

전기영동 결과를 직접 봐야 해결될수 있는 문제 일듯합니다