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10% W/V의 PBS를 추가하여 파쇄하면 버퍼양이 너무 적습니다.
soluble과 insoluble 양은 어떠 방법으로 측정하나요?
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레벨1
가나다라마마마
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21.01.24 14:29
자기만의 SOLUBLE / INSOLUBE FRACTION을 정의하셔서 버퍼를 만드시는 거도 좋을 듯 합니다.
저는 뇌과학을 하고 있어서 응집되는 단백질들을 관찰할 경우가 많은데
PBS -> 남은 펠렛 TRITON-X -> 남은 펠렛 RIPA -> 남은펠렛 UREA
이런 식으로 다양한 방식으로 쪼개서 관찰을 하는 것을 좋아합니다. 꼭 NAOH를 써야하나요?
그리고 실험군과 대조군간에 차이가 나야하는데 안난다는 것은
1. 실험디자인이 잘못되었다 (차이를 내는 유도방식이 잘못되었다)
-> 차이를 내는 방식을 한가지방식이 아닌 다양한 방식으로 확인할 것, 혹은 실험에 대한 POSITIVE CONTROL 을 같이 확인하여서 유도유무를 정확히 파악할 것
2. 참고한 논문이 잘못되었다 (혹은 논문이 친절하지 못해서 키포인트를 빼먹었다)
-> 한가지 논문이 아닌 다른 논문을 찾아봐서 좀 더 정확한 프로토콜을 찾을 것
3. 샘플준비가 잘못되었다
-> 응집되는 성질을 가진 INSOLUBLE PROTEIN 들은 샘플버퍼 종류, 환원제의 농도 혹은 유무, 끓이는 시간 혹은 온도 등에 따라 정말 다양하게 변화함
정도가 생각이 나네요. 좋은 결과 있으시길 바랍니다.
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레벨1
초코딸긔맛
(대학원생)
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21.01.26 16:15
PBS로 homogenize 한 뒤에 centri 후 상층액을 BCA assay 하여 결과를 냅니다.
혹시 조직에서의 soluble과 soluble을 측정하는 다른 방법을 아시는 선생님들 께서는 코멘트 부탁드립니다ㅠㅠ