[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
검색광고안내
어시스트바이오
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
조회 300  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 exosome BCA 정량을 하려고 하는데요.
뒷다리나는연구자(일반인)  | 01.19 20:13

안녕하세요.

exosome을 western을 하기 위해 BCA 정량을 진행했습니다. 

exosome을 우선 protein으로 lysis를 해야 하잖아요.

그래서 ripa 5ul + exosome 5ul를 넣고 ice에서 30분

진행한뒤, BCA정량을 진행했습니다. 

(혹시나 싶어서 ripa를 넣은 샘플과 넣지않은 샘플 둘다 측정을 진행했습니다.)

그런데 ripa로 lysis한 농도값이랑 그냥exosome을 넣은 농도값이 

비슷하게 나옵니다. 그럼 lysis가 안된거라 생각해야 하나요?

둘다 OD값이 대략 0.1483 정도 나왔습니다.

(양이 작으니 그건 감안해주세요.)

 

혹시 exosome을 protein으로 인지하는건가요?ㅜㅠ

도와주세요.. 감사합니다.

#exosome
 
#BCA
 
#lysis
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  01.19 21:40  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

양이 너무 적어서 판단하기 힘들지만 BCA가 detection하는 a.a의 residues가

exosome 표면 단백질에도 있기 때문에 lysis하지 않아도 측정됩니다.

양이 많으면 sonication 후 lysis하면 확실하게 lysis됩니다만 양이 적으니

RIPA 처리 후 37도 10분과 exosome 자체를 한번 비교해 보세요.

 

뒷다리나는연구자  |  01.19 21:46  
리파넣은것과 안넣은것 둘다
Ice 30분후 인큐베이션 15분 진행을 하긴 했는데,
저렇게 나왔습니다.
Sonication 이 없어서 어떻게 해야할지 난감합니다ㅜ
대왕개구리SPEED  |  01.19 21:57  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

Blank, -RIPA, +RIPA는 어느정도 값이 나왔나요?

뒷다리나는연구자  |  01.19 22:22  
Blank 0.0486
-ripa 0.2174 (exosome 5ul)
+ripa 0.1483 (exosome 2.5ul +ripa2.5ul)
로 나왔습니닷.
대왕개구리SPEED  |  01.19 22:39  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

-ripa 0.1688, +ripa 0.248이네요.

-ripa는 membrane protein, +ripa는 membrane protein + inner protein이기

때문에 양이 적지만 lysis된 것으로 봐야할것 같습니다.

참고로 이런 2종류 정량은 BNK도 2종류로 하면 좀더 정확한 BNK값의 보정이

가능합니다.

뒷다리나는연구자  |  01.19 23:15  
감사드립니다. 내일 한번 웨스턴해볼게요^^
근데 Bnk를 두종류로 하라고 하심이.. 어떤의미인지 한번만더 여쭈어봐도 될까요?
대왕개구리SPEED  |  01.19 23:32  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
-ripa bnk : exosome 용매
+ripa bnk : exosome 용매 + ripa
뒷다리나는연구자  |  01.19 23:36  
아, 용매는 pbs였습니다.
감사합니다. 정말 도움이 많이 되었습니다:)
답변하기
할인행사 광고 검색광고
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
UV/Vis Spectrophotometer 구매 시 선착순 멀티 파이펫 FREE!! 놓치지 마세요~ (4.31까지)
비앤코리아 비앤코리아
RNA/DNA 정량 장비 / 라이브 세포 이미징 장비 파격행사! 선착순으로 진행됩니다 서두르세요 (3.25까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN] Microplate reader 초특가 이벤트!! 할인이 쏟아진다~ (6.31까지)
엠피바이오메디칼스코리아 엠피바이오메디칼스코리아
토양/분변/마이크로바이옴 DNA 추출키트 파격 1+1 이벤트 ! (6.30까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
UV/Vis, Fluorescence & Cuvette 모두 가능한 기기를 이 가격에?! (3.2까지)
브래디 브래디
초저온라벨 등 실험실용 라벨링 솔루션 (4.27까지)
최근등록   더보기 >
배지 오염의 원인이 뭘까요?   02.26
ICC 실험 질문입니다.   02.26
his tag protein purification   02.26
protein purification후 elution sample aggregation   02.26
P53 mutant cell로 실험 시 p53 signaling 질문   02.26
Ligation product를 transformation안하고 보관해도 되나요??   02.26
blaTEM세분화   02.26
Oil Red O solution 추천을 해주세요   02.26
cell seeding 문의드립니다.   02.26
dna extraction kit에서 binding buffer의 역할은 정확히 어디에 어...   02.26
최근답변자 우수답변자
대왕개구리안재진

알구구가까

대왕개구리SPEED

알다스

알정제는 재미없어

올챙이무선충전기

대왕개구리강시

올챙이pmoony

꽃개구리juno

꽃개구리Kozmoj

개구리ExDown's

개구리남녀칠세마동석

개구리미네르바

꽃개구리Applied_Mi..

꽃개구리착한사람

꽃개구리느림보

실험관련연재
박은총 연재중후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
Mr.S 연재중의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재중실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
이제욱 연재중생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
10x Genomics 광고